原位杂交

服务简介：

    原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法一般用半抗原标记探针，zui后通过免疫组织化学法对半抗原定位，间接地显示探针与靶核酸形成的杂交体。

服务流程：

1. 根据客户送的样本（固定好或者包埋好），以及样本类型，安排实验

2.包埋或者切片后，根据客户所测指标，设计特异性探针，标记示踪物。然后进行一系列反应。

3.（可选）根据上述所做好的切片进行拍片，分为荧光显微镜（激光共聚焦显微镜）或普通光学显微镜

4.（可选）针对做好的玻片进行分析，分析时选取较好的区域，分析三个视野

5.提供实验报告：包括详细的实验方法及原位杂交实验结果的相关图表 

操作步骤：

   取材：
    ● 0.1M PBS (pH 7.2) 浸 5-10min。
    ● 0.1M甘氨酸/0.1M PBS 浸5min。
    ● 0.3%TritonX-100/0.1M PBS 浸10-15min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×3次，加蛋白酶K(1μg/ml)，37℃孵育30 min。
    ● 4%多聚甲醛浸5min。
    ● 0.1M PBS 洗 5min×2次，浸入新鲜配制的含0.25%乙酸酐/0.1M三乙醇胺中10min。
    预杂交：滴加适量预杂交液，42℃ 30 min。
    杂交：倾去预杂交液，在每张切片上滴加10-20μl杂交液（将探针变性后稀释在预杂交液中，0.5 ng/μl ），覆以盖玻片或蜡膜，42℃ 过夜。（阴性对照）
    洗片：(1) 4×SSC、2×SSC、1×SSC、0.5×SSC 37℃各洗20min；0.2×SSC 37℃洗10min；0.2×SSC与0.1M PBS各半洗10min；0.05M PBS 洗 5min×2次。
    ● 3% BSA/0.05M PBS 包被，37℃ 30min.
    ● 滴加抗地高辛-抗血清碱性磷酸酶复合物（以抗体稀释液1:5000稀释）4℃孵育过夜。
    ● 0.05M PBS洗15min×4次; TSM1 10min×2次; 新鲜配制TSM2 10min×2次。
    显色：在玻片上滴加适量显色液，4℃避光过夜。
    ● 将玻片置于TE中10-30min以终止反应。
    ● 酒精梯度脱水、二甲苯脱脂。
    ● 中性树胶封片，显微镜下观察结果

交货内容：

完整的实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、蜡块玻片和相关分析数据

收费标准/服务周期/提供结果：
详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

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