细胞凋亡检测

服务简介：

细胞凋亡(Apoptosis)：多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定，由基因控制的细胞主动性死亡过程。多细胞生物体内，某些细胞的死亡是个体发育中一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。不同于一般的细胞坏死(cell necrosis)。细胞凋亡是指由基因控制的细胞自主有序死亡的主动过程，涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。针对凋亡时期不同，检测的方法有所不同。
    提供的细胞凋亡检测技术服务包括有Annexin V/PI双染检测细胞早期凋亡和TUNEL法检测细胞晚期凋亡， 可用于检测不同类型、不同处理方式、不同时期细胞凋亡状况及分析凋亡细胞比例。

一、流式细胞仪检测细胞凋亡——Annexin V/PI 双染色法

原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS)迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），用流式细 胞仪即可检测凋亡细胞。细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏；Annexin V染色法不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin V法更加省时，简单，结果更为可靠，是目前zui为理想的检测细胞凋亡的方法。

二、TUNEL

 原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。

服务流程：
Annexin V/PI双染检测调亡（适用于细胞早期凋亡检测）
1.细胞培养及接种
2.诱导细胞凋亡
3.细胞收集、计数
4.Annexin V/PI标记
5.流式细胞仪检测
6.结果分析
TUNEL法检测细胞凋亡（适用于细胞晚期凋亡检测）
1.标本预处理
2.内源性过氧化物酶灭活
3.TdT酶反应
4.生物素标记
5.染色
6.封片观察

收费标准/服务周期/提供结果：
详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

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