BeYaMA^TM 1 订购信息

Juvi^TM  Human iPSC/ESC Growth Medium

BeYaMA^TM 1

Juvi^TM  Human iPSC/ESC Growth Medium

人多能干细胞无血清培养液*实验操作手册

• 培养皿包被

1. 4℃溶解Matrigel（BD 354277）6小时，轻摇混匀。请注意：原液应是均质粘稠的半流体状态，要避免温度过高，否则Matrigel会变成凝胶状态。
2. 冰上预冷1.5ml离心管和移液器枪头，冰上快速将Matrigel分装成350-500ul/支，储存于-80℃，用前置于4℃解冻。
3. 将溶解的Matrigel加入25ml预冷的无血清DMEM/F12培养基中，轻轻混匀，避免产生气泡。
4. 将稀释的Matrigel加入六孔板中，1ml/孔，轻摇培养板，使Matrigel均匀铺在培养板底部。
5. Parafilm封好包被的培养板，至于4℃储存，用前置于37℃培养箱中孵育至少1小时。

• 培养液准备

1. 在4℃解冻BeYaMA^TM 1 5X Supplement（货号：HJ0103M）添加剂，加入BeYaMA^TM 1 Basal Medium（货号：HJ0102M）基础培养基中，形成500mL BeYaMA^TM 1 Complete Medium（货号：HJ0101M）*培养基。
2. BeYaMA^TM 1*培养基可在4℃稳定储存2周。可按实际用量将BeYaMA^TM 1*培养基分装后置于-80或-20℃保存，避免反复冻融。

• hESCs/hiPSCs复苏

1. 复苏hESCs/hiPSCs前，复温Matrigel包被的培养板，吸弃孔内液体，加入2ml BeYaMA^TM 1*培养液及2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632，用以促进细胞贴壁。
2. 从液氮罐中取出hESCs/hiPSCs冻存管，浸入37℃水浴，轻轻摇晃，直到细胞融化至仅剩一小块冰晶，迅速取出并用75%酒精擦拭冻存管外表面，转移至无菌超净台中。
3. 将细胞悬液接种至准备好的培养板中，轻轻晃动使细胞均匀分布在板底。
4. 小心将培养板放置于培养箱中，避免振动。
5. 30-90min后显微镜下观察细胞基本贴壁，更换新鲜BeYaMA^TM 1*培养液，之后每24h换液，4-6天后传代。

• hESCs/hiPSCs传代

1. 提前准备好Matrigel（BD 354277）包被过的六孔板，吸弃孔内包被液，加入2ml BeYaMA^TM 1*培养液。
2. 吸弃待传代hESCs/hiPSCs孔内的培养液，并用1ml无钙镁的PBS洗1遍。
3. 加入0.5ml Accutase细胞分离液使之*覆盖皿底。
4. 室温孵育5-8分钟或37℃孵育3-5分钟，显微镜下观察到大部分克隆细胞间出现间隙，细胞表面发亮但尚未相互分离时，可吸去Accutase。
5. 可将培养板放置37℃继续孵育1min,或者直接加入适量新鲜BeYaMA^TM 1*培养液，轻轻摇晃，干细胞集落基本脱落。亦可用细胞刮刀将剩余克隆轻轻刮下，尽量避免用枪头反复吹打细胞。
6. 将制备好的细胞悬液按1：3 - 1：6的比例接种至准备好的培养板中，注意细胞过密则克隆边界不圆滑，易分化，细胞过稀则克隆存活率降低。
7. 轻轻摇晃培养板让细胞均匀分散，置于37℃，5% CO²培养箱中培养6小时。
8. 每天更换培养液，待细胞密度达到80%以上，或者克隆中央密度过大，影响细胞生长时进行传代。

如果您在使用BeYaMA^TM 1  Juvi^TM Human iPSC/ESC Growth Medium 人多能干细胞无血清培养液的过程中，有任何技术问题，我们开通了Juvi科学家技术团队，欢迎您发邮件到Juvi@hystemcell.com 进行交流沟通，我们的目标是：推动中国iPS干细胞技术走向产业和临床！