产品名称：GST标签纯化树脂(GST Resin)
产品编号：P2020
保存：4℃保存，有效期至少一年 
产品简介： 
 pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST标签纯化树脂及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。GST标签纯化树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。 
  谷胱甘肽琼脂糖对GST 融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。
特性特性: 
  粒度：45-165um       流速：75cm/h            
  工作PH:4-10        耐压:0.3Mpa 
  载量:＞5mg 谷胱甘肽 S-转移酶 
使用说明： 
  GST标签纯化树脂的处理: 
 1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。 
 2.取部分匀浆放入15ml聚丙烯管（每100ml 细菌培养物大约需要2ml 匀浆）。 
 3.4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。 
 4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。 
 5.每毫升GST标签纯化树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。 
  制备细胞抽提物： 
 6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mlPBS缓冲液中。 
 7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/ml,冰上放置30分钟。 
 8.用针筒将10ml 浓度为0.2%的TritonX100 强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5ug/ml, 4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上
清转移到一只新管中，加入DTT 至终浓度1mmol/L。 
  纯化融合蛋白： 
 9.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mlGST标签纯化树脂，于室温轻摇30min。 
10.混合物于4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 
 11.沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。 
 12.4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 
 13.重复步骤11和12两次。 
 14.结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa 因子切割，释放靶蛋白。  
  用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白： 
 a.沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱GST标签纯化树脂上结合的蛋白。 
 b. 4℃以500 g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。 
 c.重复步骤a和b两次，合并3次上清。 
  蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白： 
 a.  在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mlGST标签纯化树脂加入50单位溶于1mlPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定时间。 
 b.4℃以500 g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST 仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
15.10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。 
试剂配制： 
  谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L TrisCl (pH8.0) 
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