产品名称：Trizol
产品编号：Invitrogen原装 15596-026
说明：Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。Trizol含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。Trizol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
Trizol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能*抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
Trizol是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，Trizol能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
Trizol使用方法：
该法从细菌中提取RNA——用匀浆器将组织磨碎，加入Trizol处理组织。5分钟后加入氯仿，以每分钟12000转离心5分钟，样品即分成水样层、中间层和有机层。
※RNA存在于水样层中，收集水样层后可以通过异丙醇沉淀RNA来还原。
※在除去水样层后，中间层中的DNA和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原：乙醇能使中间层的DNA沉淀析出，在中间层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。
每100ml Trizol可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织（50-100mg)和细胞（约五百万个）及大量的组织（≥1g）和细胞（超过一千万个）均有较好的分离效果。
每一百万细胞用Trizol抽提可得5-15微克RNA，每毫克组织用Trizol抽提可得1-10微克RNA（产量因细胞和组织不同而异）。
Trizol操作上的简便性允许其同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。
Trizol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白质的污染，故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和单分子克隆（PCR）。
※如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用级联扩大的DNase I
※Trizol试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA经过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间的不连续的高分子量条带（mRNA和hnRNA成分），两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA时宜-70℃沉淀放置一夜。
Trizol注意事项：
⒈从少量的组织（1—10 mg）或细胞（102—104）中分离RNA 样品：往组织或细胞中加入800 ml Trizol。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤2中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA之前，加入5—10μg无RNA酶的脂质体作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用26号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。脂质体会留在水样层中并和RNA共析出。在浓缩到4 mg/ml之前它不会抑制*丝状体的合成也不会抑制PCR。
⒉在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在–60—–70°C保存至少一个月。RNA沉淀（步骤4，RNA洗脱）溶于75%的乙醇在2—8°C至少可以保存一周，在–5—–20°C下至少可保存一年。
⒊台式离心机大能达到2,600×g的离心力，如果将离心时间延长到30-60分钟可以满足步骤2和步骤3中的操作。
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PC1200    Taq Plus DNA Polymerase    500U/1000U
PC1220    2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料）    1ml/5×1ml
PC1250    2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料）    1ml/5×1ml
PC1300    Pfu DNA Polymerase    500U/1000U/10k
PC1320    2×Pfu PCR MasterMix (含染料）    1ml/5×1ml
PC1350    2×Pfu PCR MasterMix (不含染料）    1ml/5×1ml
PC2100    dNTPs Mix(2.5mM each)    500ul/1ml
PC2200    dNTPs Mix(10mM each)    500ul/1ml
PC2300    4×dNTPs(100mM)    4×100ul/E
PC2300    4×dNTPs(100mM)    4×400ul/E
PC2300    4×dNTPs(100mM)    4×1ml
PC2301    dATP(100mM)    100ul/400ul
PC2302    dTTP(100mM)    100ul/400ul
PC2303    dCTP(100mM)    100ul/400ul
PC2304    dGTP(100mM)    100ul/400ul