Annexin V PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到 十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为 35.8 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡 过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结 合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶 （Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的 破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将 FITC-Annexin V 与 PI 匹配使用，可以将凋亡早期的细 胞和晚期的细胞区分开来。

Annexin V PE/7-AAD 凋亡检测试剂盒

产品简介：
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所*的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以采用 AnnexinV 与7-AAD 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。

操作步骤:

标记的 Annexin V 可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸
1.用去离子水按 1:4 稀释结合缓冲液（4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水）；
2.用 4℃预冷的 PBS 洗细胞两次，用 250ul 结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为 1× 106/ml；
3.取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/PE 和 10μl 7AAD 溶液；
4.混匀后于室温避光孵育 15 分钟；
5.在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪（FACS）分析

（注：消化细胞时不能用含 EDTA 的胰酶）

 相关文献:

《The establishment of clonally derived chicken embryonic fibroblast cell line (CSC) with high transfection efficiency and ability as a feeder cell》 作者:Ruifeng Zhao , Jing Jin , Xinyu Sun , Kai Jin , Man Wang , Mahmoud F. Ahmed , Qisheng Zuo , Yani Zhang ,Zhenhua Zhao , Guohong Chen , Bichun Li 期刊:Journal of cellular Biochemistry 影响因子:3.062 PMID:30076744