TEV 蛋白酶

(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶，该酶特异性识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly七氨基酸序列。rTEV蛋白酶与肠激酶U(EK)Thrombin、Factor Xa、SUMO等蛋白酶相比，具有高活性、高特异性的双重特点，rTEV蛋白酶因具有高剪切活性和特异性，已成为融合蛋白表达后去除融合tag的蛋白酶。该酶经6×His标签纯化而得(含组氨酸标签)，纯度达99％，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010,  Solarbio)去除。该酶在2-8℃-30℃温度、pH范围
(6.0-8.5)反应条件下均具有活性(见下表)。不同温度下剪切活性(%)
       4℃  16℃  21℃ 30℃
0.5 h   34  58    56   70
1 h     58  80    78   90
2 h     71  99    99   99
1 h     84  99    99   99
组分与保存条件:
组分名称                数量       保存
rTEV 蛋白酶(10 U/μl)  100μl     -70℃/-20℃
20XrTEV Buffer          1 ml       -20℃
活性定义:在1XrTEV Buffer(50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT)，30℃反应1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
保存条件:长期储存-70℃，可储存1年，-20℃，可储存6个月。

使用方法说明：
1. 推荐使用溶液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10%甘油，pH 8.0 buffer中进行剪切。
2. 250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA, 250 mM DTT, PH 8.0
3.  蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100
4. 酶切体系：

融合蛋白 1000 μg
250×rTEV Protease Buffer 4μL
r 蛋白酶 2μL
定容 1000μL
定容缓冲液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl
5. 酶切条件：在 16℃酶切 6hr。用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索酶切条件，可适当加大酶量或延长酶切时间。
6. 可取少量样本进行 SDS-PAGE 分析，若要去除酶切后体系中的蛋白酶，可用 His 标签纯化树脂亲和层析。

参考文献：

《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影响因子:2.197 PMID:30941371