酵母基因组DNA大量提取试剂盒

产品简介： 
本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和*的缓冲液系统，提取酵母基因组 DNA。离心吸附柱中 采用的硅基质材料为本公司*新型材料，能够高效专一吸附 DNA，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机 化合物。提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规 操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。

操作步骤： 
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在 室温下离心。 
1、在离心管中收集酵母细胞 20-40ml(不超过 109 ce l1 s)，10000rpm 离心 1min，尽量吸除上清。 
2、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分悬浮菌体，加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巯 基还原剂，充分混匀。30℃处理 1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。 
3、10000rpm 离心 lmin，弃上清，收集沉淀。 
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温 放置 10min。 
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml)，充分颠倒混匀。65℃水浴消化 30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次， 直样品消化*为止。 
6、加入 5ml 溶液 B，再加入 5ml 无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。 
7、10000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 
8、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。10000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱 放入收集管中。 
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液， 10000rpm 离心 l min， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。 
10、10000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除， 否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。 
11、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 1-2ml 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min， 10000rpm 离心 l min。 
12、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，10000rpm 离心 2 min，即可得到高质量的基因组 DNA。

注意事项： 
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。 
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。 
3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。 
4、洗脱缓冲液的体积不少于 1ml，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需要 用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调此范围)， pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。 
5、 DNA 浓度及纯度检测：得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回 收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰，OD260 值为 1.0 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/0D280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗 脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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相关文献：

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《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影响因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影响因子:2.275 PMID:23597844
 

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