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克必隆常态转化液产品及特点
克必隆常态转化液是天恩泽推出的具有自主知识产权的革命性产品,它能
使各种常态的 E.coli 细胞直接用于快速转化实验,使广大用户不再因为简单的转化
实验而再为感受态细胞的制备,保存和运输等繁琐的事情而操心,大大地缩短了基
因克隆实验的时间,提高使用者的工作效率。
1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十
分方便。常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,
甘油菌种保存液等。
2. 适用菌种和质粒广泛,用过的 E.coli 菌种包括K12系的DH5a和Tg1,B系的
BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM,pET和克必隆系列等。
3. 转化效率适中,使用10 ng质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在10 5 到
10 6 CFU/ μ g质粒之间),使用3-5 μ L连接液转化一般能得几千个转化子,足
够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。
4. 单管快速操作,整个操作可以在一个1.5 mL塑料离心管中进行,zui短可以在
三十分钟内完成,不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用
于自动化的大规模克隆筛选工作。
5. 稳定性好,本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受
态细胞在同样条件下会迅速失去活性。
使用及效果
将数个 E.coli 菌落(或50 μ L甘油菌种液,100 μ L新鲜培养液)转入装有1 mL
液体培养基的1.5 mL塑料离心管中,37℃水浴1小时,室温10000 g离心1分钟后
去尽上清,加入转化液和1-10 μ L连接反应液,轻柔混匀,-20℃放置致凝,冰浴5
分钟,加入1 mL 液体培养基,37℃水浴1小时,取0.1-0.3 mL涂于含相关抗菌素
的固体培养基上,37℃过夜培养后即得转化菌落。120506-200 T4 聚核苷酸激酶 200U 197 10-48
120507-25 Xa 因子蛋白酶 25μg 490 10-100
120507-50 Xa 因子蛋白酶 50μg 890 10-100
120508-0.032 肠激酶 ( 轻链 ) 0.032μg 790 10-100
120508-0.063 肠激酶 ( 轻链 ) 0.063μg 1490 10-100
120509-20 Poly(A) 聚合酶 20U 690 10-30
120510-200 ATP 依赖的 DNase 200U 590 10-68
120511-100 CpG 甲基转移酶 (M.SssI) 100U 860 10-46
120512-20 即用型蓝白 T 载体 B 型 (T7-T3, 有 MCS) 20 次 290 6-10
120513-20 即用型蓝白 T 载体 C 型 (T7-T3,无 MCS) 20 次 290 6-11
120514-20 即用型蓝白 T 载体 D 型 ( 无启动子,有 MCS) 20 次 290 6-12
120515-20 即用型蓝白 T 载体 E 型 ( 无启动子,无 MCS) 20 次 290 6-13
120516-200 自诱导液体培养基 (arab 启动子 ) 200mL 390 6-42
120517-100 大肠杆菌零诱导培养基 100mL 390 6-45
120520-10 OrigamiB(DE3) 感受态细胞 10×100μL 397 6-28c