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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流，选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化，不染溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。 |
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◆特点
● 无需转染，定量监测活细胞中的自噬情况
● 免去LC3-GFP转染所需的时间和精力以及转染效率的验证
● 含有特殊基团的染料选择性地染色自噬小泡
● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与激活剂
● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬
● 选择性地染色，可检测和区分自噬流（autophagic flux）和自噬溶酶体的积累
● 不染溶酶体，减少其他染料的背景干扰
● 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂
◆原理
该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂（CAT）染料，以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡，而不会在溶酶体中聚集。
胞内物质被扩大的膜囊包裹，吞噬泡形成双层膜囊泡，成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合，和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。 |
自噬原理图 |
◆应用
省时省力，无需转染即可自快速全面的标记自噬小泡 为了演示CYTO-ID® Green detection reagent的优势，先用RFP-LC3表达载体转染HeLa细胞， 10μM的Tamoxifen处理过夜，然后用CYTO-ID® 绿色检测试剂染色。LC3转染法需要过夜，而CYTO-ID® 绿色检测试剂的方法在15-30分钟内标记细胞达100％。图A：绿信号显示自噬小泡的CYTO-ID® 绿染;图B：成功转染细胞的RFP-LC3表达（红色）;图C：自噬体的特异性标记LC3，与CYTO-ID® 绿色染料标记的小泡共定位的复合图像。 |
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无转染的自噬检测 Hela细胞进行饥饿与恢复，然后使用CYTO-ID® Green detection reagent标记。染料可以明确检测和量化自噬及与自噬诱导相关的自噬小泡前体。图1A：稳定表达GFP-LC3的CHO细胞，结果显示对照组与饥饿的细胞群的相对较差的基线分离，自噬难以量化。图1B：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit特异性标记LC3蛋白依赖的自噬小泡，免去转染操作。 |
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自噬积累和自噬流的可视化 可用荧光显微镜观察CYTO-ID® 自噬绿色染料检测的自噬液泡积累和自噬流。Hela细胞用以下试剂进行模拟诱导，0.2% DMSO（A）和100μM Clonidine hydrochloride（B）进行诱导，5μM Loperamide hydrochloride和1 μM PP242 hydrate（D）在37°C诱导12小时。处理后，细胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent孵育10分钟，再用分析缓冲液清洗。细胞核被Hoechst 33342染料复染为蓝色。 |
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避免非特异性溶酶体染色的背景干扰 相比其他MDC染色溶酶体检测，CYTO-ID® 绿色染料无溶酶体染色背景，CYTO-ID® Autophagy kit无需紫外活细胞分析，在显微镜共标记应用中，与Hoechst染料兼容。 |
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使用流式细胞仪通过CYTO-ID® Autophagy Detection Kit分析自噬 对照组（红线峰值）无诱导，10 uM Tamoxifen (ALX-550-095)处理Jurkat细胞（白血病T细胞）（蓝线峰值）。处理18小时后，细胞结合CYTO-ID® 绿色检测试剂，然后不经过流式细胞仪清洗，进行分析。结果通过直方图呈现。对照组细胞被染色，但荧光亮度低。实验组中，CYTO-ID® 绿色荧光信号增加约2倍，表明Tamoxifen处理能引起Jurkat细胞中自噬的增加。 |
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使用mTOR激酶抑制剂Rapamycin处理HepG2细胞孵育过夜，结果显示CYTO-ID® 染色信号升高。 |
CYTO-ID® 绿色染料大多与RFP-LC3蛋白共定位。0.1μM Rapamycin（典型自噬诱导剂）处理过夜，转染Hela细胞表达RFP-LC3。A: CYTO-ID® Green染色； B: RFP-LC3； C: 合成图像。 |
◆产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| ENZ-51031-K200 | CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 | 200 tests |
| ENZ-51031-0050 | CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 | 50 tests |
◆相关产品
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 备注 | 应用 |
ENZ-51002-25 | 细胞凋亡/坏死检测试剂盒 | 25 assays | 多重检测，区分正常、 早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞，与GFP和其他绿色荧光探针兼容。 | FC，荧光显微镜，荧光检测 |
ENZ-51002-100 | 100 assays | |||
ENZ-51021-K200 | 细胞核绿色染色体皱缩检测试剂盒
| 1 Kit | 高渗透性的绿色荧光染色增强了细胞凋亡诱导染色质固缩。
| FC，荧光显微镜，荧光检测 |
ENZ-52406 | DNA染色试剂盒（红色荧光） | 200 µl | 细胞可渗透的DNA染色应用广泛。 | ≥93％（HPLC），FC，荧光检测 |
ENZ-CHM103-0200 | Nuclear ID® 蓝色DNA染色（GFP细胞系） | 200 µL | 细胞可渗透的DNA染色应用广泛。 | ≥93％（HPLC），FC，荧光检测 |
ENZ-51015-KP002 | 溶酶体细胞毒理检测试剂盒（红色荧光）（绿色细胞系） | 1 Kit | 快速，定量和HTS-兼容的检测活细胞毒性试剂。 | 荧光显微镜，荧光检测 |
ENZ-51035-0025 | 蛋白内稳态® 聚集体 检测 试剂盒 | 25 tests | Robust、定量的聚集小体用于神经退行性疾病，肝病和毒理学研究 | FC，荧光显微镜，荧光检测 |
ENZ-51035-K100 | 100 tests |
CYTO-ID® 自噬检测试剂盒
