Iba1抗体，兔源（免疫组化用）

Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)

Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1）是分子量约为17 kDa的钙结合蛋白。由于在中枢神经系统中，Iba1在小胶质细胞中特异性表达^1），因此被用作小胶质细胞标志物。据报告称，Iba1在静息型小胶质细胞和活化型小胶质细胞中均有表达，但有报告称在活化型小胶质细胞中其表达会有所增加^2）。另外，Iba1也会在外周组织的巨噬细胞中表达，被称为AIF-1（同种异体移植物炎症因子1，Allograft inflammatory factor-1）。Iba1在细胞内与F-肌动蛋白结合，发挥着形成肌动蛋白纤维束的作用。这种肌动蛋白纤维束的形成被认为是细胞迁移和吞噬过程中观察细胞膜波动结构形成所必须的^3）。

抗Iba1，兔源（免疫组化用）在免疫组织染色中可以对小胶质细胞包括突起一并进行染色，因此被世界各地的研究人员作为小胶质细胞标记抗体的标准来使用。

近年来，小胶质细胞因其神经营养和保护作用以及通过产生NO、TNF-α和IL-1β引起的神经损伤作用备受关注。

小胶质细胞的染色图像

Anti Iba1，兔源（免疫组化用）

◆特点

● 在免疫组织染色（冰冻切片）中可染色小胶质细胞包括其突起^※

● 使用浓度为1︰500 - 1︰1,000，少量使用也可染色。

※ 染色程度取决于样品状况，无法保证一定能染色成功。

◆抗体信息

※ 拥有犬^4）、猫^5）、猪^6）、狨猴^7）、斑马鱼^8）的应用实例

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◆应用数据

免疫组织染色（小鼠）

免疫组织染色（大鼠）

◆Anti Iba1抗体系列

◆Anti Iba1产品列表

相关资料

◆原代小胶质细胞ICC实验方案示例

将从新生大鼠（出生0~2天）的大脑中制备和培养的原代混合胶质细胞按照1.0×105 cell/well接种至4 well-plate、13 φmm盖玻片（PLL涂层）。

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固定：4% formaldehyde-PBS, 15 min

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清洗：PBS

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通透：0.1% TX-100 PBS, 5 min

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封闭：3% BSA-3% normal goat serum-PBS (blocking buffer), >15min

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一抗反应：抗Iba1抗体（1:1,000）blocking buffer, 1h

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清洗

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二抗反应：Alexa Fluor 488标记抗兔IgG抗体/blocking buffer, 1h

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封片

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在荧光显微镜下进行观察

FAQ

◆关于抗体

Q1：抗原是什么样的？

A1：是Iba1的合成肽（C端序列相同）。具体序列未公开。

Q2：50 μg的使用量是多少？

A2：在免疫组织染色中，每张玻片使用200 μL抗体溶液（稀释度为 1:1,000）的情况下，可使用约500次。

◆关于实验方案

Q3：建议使用哪种二抗？

A3：FUJIFILM Wako拥有以下二抗的使用实例，可供参考。

Alexa Fluor^® 488-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司, 厂家编号: 111-545-144）

Alexa Fluor^® 647-conjugated AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)　(Jackson ImmunoResearch公司, 厂家编号: 711-605-152)

◆关于故障排除

Q4：WB中无法检测出条带

A4：本抗体适用于免疫组织染色（冰冻切片）以及免疫细胞染色，如需进行WB，请使用 抗Iba1,兔源（Western Blotting用) （产品编号：016-20001）

Q5：免疫组织染色和免疫细胞染色中小胶质细胞无法染色

A5：可能导致此问题的原因有以下几种，请尝试对应的解决方案。

1. 固定不充分

有报告称，未灌注固定或固定不充分的样品染色效果会降低。请在免疫组织染色中使用4%多-聚甲醛（PFA）进行灌注固定后再制备冰冻切片。

2. 抗原变性

请尝试在以下条件下进行抗原修复操作

（A）柠檬酸缓冲液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE缓冲液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

3. 样品变质

需要重新制备样品，切片厚度约为20-50 μm。

4. 抗体量少

请提高抗体浓度，推荐浓度为1︰500~1,000。

Q6：免疫组织染色和免疫细胞染色的背景过高。

A6：导致此问题的可能原因有以下几种，请尝试对应的解决方案。

① 封闭不充分

请尝试延长封闭的孵育时间或更换封闭试剂。建议使用推荐Protocol中记载的1% BSA, 含0.3% TritonX-100的PBS和含1% BSA, 0.3% Tween-20的PBS，或3%二抗宿主的正常血清。

② 一抗的量过多

请降低一抗浓度，推荐浓度为1︰500~1,000。

③ 二抗的反应时间过长

请缩短反应时间。推荐反应时间为1~2 h，或增加二抗反应后的清洗次数。

④ 样品变质

需要重新制备样品，切片厚度约为20-50 μm。

⑤ 抗原变性

请尝试在以下条件下进行抗原修复操作

（A）柠檬酸缓冲液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE缓冲液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

⑥ 内源性的过氧化物酶发生反应（使用HRP或POD作为检测酶时）

为了灭活内源性过氧化物酶，请在阻断前使用含3%过氧化氢的80%甲醇溶液，并在-20℃条件下处理20 min。

Q7：在免疫组织染色中，除小胶质细胞外，神经细胞也被染色。

A7：可能导致此问题的原因有以下几种，请尝试对应的解决方案。

① 抗体的量过多

请降低一抗或二抗的抗体浓度，抗Iba1抗体的推荐浓度为1︰500~1,000。

② 二抗的反应时间过长

请缩短反应时间。推荐反应时间为1~2 h，或增加二抗反应后的清洗次数。

③ 抗原变性

请尝试在以下条件下进行抗原修复操作

（A）柠檬酸缓冲液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE缓冲液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

◆关于应用数据

Q8：本抗体可以用于流式细胞仪吗？

A8：FUJIFILM Wako没有使用实例，但以下论文中使用了本抗体，敬请参考。

Koh, H. S., et al.: Nat. Commun., 6(1),1(2015).
The HIF-1/glial TIM-3 axis controls inflammation-associated brain damage under hypoxia.

参考文献