产品描述

Anti-GFP磁珠是粒径为200nm的纳米磁珠表面上共价结合了大量的高质量的鼠源抗GFP单克隆抗体 纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中带有GFP标签融合蛋白的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。 由于采用磁性分离，使得每次IP和Co-IP可以节省40%的时间。

订购信息

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。注：避免冻融或离心磁珠。

技术参数

使用方法

贴壁细胞样品：

1. 移去培养基，用PBS洗细胞两次。

2. 收集细胞至1.5 mL EP管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

3. 4℃，12000-16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于 -80℃ 长期保存）。

表1.培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积

悬浮细胞样品：

1. 4℃、500-1000xg、10 min，收集细胞，弃上清。

2. 用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000xg、5 min，收集细胞，弃上清。

3. 用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50 mg 细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

4. 4℃，12000 -16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。

血清样品：

一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50-150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

免疫沉淀：

注：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。

1.   将25-50µL的Anti-GFP免疫磁珠加入1.5 mL离心管中。

2.   向磁珠中加入500 µL预冷PBS，轻柔混匀。

3.   将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边，去除上清。

4.   向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 min。用磁力架收集磁珠，去除上清。

5.   将含有GFP标记蛋白加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h，或4℃ 2-4 h。

6.   用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。

7.   向离心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀磁珠5-10min。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

8.   变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。注：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。

低pH洗脱：向离心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer来中和低pH。

注意事项

1.   本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.   请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3.   IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物相关试剂，详见底部。

4.   磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

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本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。