Phos-tag^™ 琼脂糖 Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™是由广岛大学高分子科学系开发的一种中性pH环境(生理pH)下的新型磷酸结合标记。Phos-tag^™ SDS-PAGE这种电泳方法可以同时分析磷酸化蛋白异构体和配对二价锰的非磷酸化蛋白，是一种使用Pho-tag^™琼脂糖用于分离，纯化和富集磷酸化蛋白质的全新方法。 这种方法的基础是金属固化亲和层析(IMAC)，使用磷酸结合标记分子（双核锌(II)络合物），该标记分子接在高度交联的琼脂糖上（Phos-tag琼脂糖）。

Phos-tag^™磷酸化亲和电泳原理

Phos-tag Agarose特点：

■ 在1小时内纯化磷酸化蛋白
■ 所有操作在生理条件下（pH7.5）
■ Phos-tag 琼脂糖操作过程与常规亲和纯化层析相类似
■ 无需还原剂和表面活性剂

Phos-tag ™应用：在A431裂解液中的磷酸化蛋白的纯化

M：分子量标记 Lane 1：未吸附层 Lane 2：吸附层 Lane 3：柱清洗层 把Phos-tag™填充到柱里，再加上A431 裂解液。 SYPRO Ruby染色（左图）再使用Anti-p Tyr抗体进行免疫印迹（右图），检测出结果。 结果确认磷酸化蛋白浓缩在柱吸附层里。

Phos-tag ™Agarose 使用注意事项：

1. 当Phos-tag™ 琼脂糖凝胶床按使用规范固定在1毫升时，很容易根据样品的量来优化。
在测定缓冲液pH值之前，使用2中不同pH值的缓冲溶液（例如 pH 4和7）对电极进行校正

2. 当大量的裂解液蛋白（例如0.60 mg A431 细胞蛋白，在0.25 mL RIPA缓冲液中)用在1-mL凝胶床, 一部分蛋白会在通过和洗涤时被洗脱出来。使用2倍体积的RIAP缓冲液(例如 0.50 mL, 0.50 mg 裂解液蛋白)和1-mL 凝胶床时会产生一个峰, 可以归因于由EDTA消除HOVO32- 或zinc(II)-所产生的竞争结合。

3. 部分蛋白在离心过滤时被吸附。请使用蛋白质定量方法（例如Bradford法）估计洗脱出的蛋白质回收率。

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上述产品在2-10°C下保存

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