Phos-tag^™ 生物素 Phos-tag^™ Biotin

磷酸化蛋白质的免疫印迹分析
- 使用生物素标记的Phos-tag^™ 进行化学发光检测

Phos-tag^™ BTL-104和BTL-105为PVDF膜上的磷酸化蛋白检测提供了一种敏感的方法。该方法需要用到链霉亲和素标记的辣根(HRP)和化学法官检测试剂。

Phos-tag^™ Biotin

Phos-tag^™生物素用于免疫印迹分析的原理

Phos-tag Biotin的特点：

■ 对磷酸化蛋白的检测极其灵敏 Phos-tag特异性结合与氨基酸基序列无关
■ 可适用于下游的抗体探针和质谱分析等
■ 操作过程与常规使用辣根标记抗体检测近似

Phos-tag™ Biotin应用：

（一）在PVDF 膜上检测磷酸化蛋白

摘自Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749

Phos-tag™ Biotin使用注意事项：

1. 在10μL溶剂E的Phos-tag BTL相对于1μL溶剂G的链霉亲和素标记辣根氧化酶而言，大大地过量。使用更小量 Phos-tag BTL (例如1μL 溶剂E) 和溶剂 G (1μL) 得到同样的结果. 用户可以调整溶剂E的体积以获得同样的灵敏度或者节省经费。如果溶剂E的体积减少，不需要调整zinc(II) 溶液的量(溶剂 F)。 按规范使用买了的磷酸化蛋白和链霉亲和素标记辣根氧化酶(GE Healthcare Bio-Sciences)，可以观测到BTL-104和BTL-105在检测效率上存在细微差别（由于间隔效应）。

2. 如果膜没有在溶剂C中*浸润，背景信号就会升高并形成斑点。更严重的是，无法观测到蛋白质信号。请确认膜不会排斥溶剂C。

3. 强烈建议使用PVDF膜用于Phos-tag™ BTL方法。

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考虑到更佳的溶解度，**次使用时，试用Phos-tag Biotin BTL-104。
可以观测到BTL-104和BTL-105在检测效率上存在细微差别（由于间隔效应）。
BTL-111S1拥有更长的亲水性间隔, 因此比BTL-104有更高的灵敏度。

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