1M 醋/乙酸锂溶液 酵母

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2021-02-05 11:48:11
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西安齐岳生物科技有限公司

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产品简介

1M 醋/乙酸锂溶液 酵母
酵母单杂交早是1993年由Li等从酵母双杂交发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测某些转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和性,现已被用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的某些转录因子。

详细介绍

1M 醋/乙酸锂溶液 酵母

 

英文名:1M Lithium Acetate solution

描述:齐岳出品的酵母转化试剂盒主要用于酿酒酵母质粒转化实验,该试剂盒遵循广大用户的使用习惯,分别提供PEGLiAcCarrier DNA溶液,PEGLiAc均经过滤,Carrier DNA经优化处理,更有助于质粒DNA的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制1 × LiAc溶液和转化预混液,既方便使用,又经济实惠。

感受态细胞制备:

 

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 ℃培养2-4天。

 

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。

 

3.待酵母单菌落长至直径2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL YPDA液体培养基中,30 ℃过夜培养。

 

4.天转接到含有30-50 mL YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,待OD6000.4-0.53000 rpm离心5 min,弃上清。

 

5.沉淀用30-50 mL的无菌的去离子水悬浮。3000 rpm离心5 min,弃上清。

 

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc150 μL 10 × LiAc Solution1350 μL无菌水)重悬后转移至1.5 mL离心管中,3000 rpm离心5 min,弃上清。

 

注意:10 × LiAc Solution经过pH缓冲,添加TE作为缓冲剂。

 

7.加入1 mL 1 × LiAc重悬,小体积转化按照每管100 μL分装,用于文库转化不分装。

 

8.3000 rpm离心5 min,弃上清,感受态细胞即制备完毕。

 

注意:制备好的感受态立即使用,在8步离心前,室温放置不应过5小时。

供应产品列表:

 

DO Supplement -His/-Met/-Ura
DO Supplement -His/-Trp
DO Supplement -Leu
DO Supplement -Leu/-Ile/-Val
DO Supplement -Leu/-Lys/-Trp
DO Supplement -Leu/-Met
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp/-Ura
DO Supplement -Leu/-Met/-Ura
DO Supplement -Leu/-Ura
DO Supplement -Met
DO Supplement -Met/-Trp/-Ura
DO Supplement -Met/-Ura
DO Supplement -Ura
DO Supplement-Ade-His-Leu-Trp
DO Supplement -His/-Leu
DO Supplement-His/-Leu/-Met/-Trp
DO Supplement -His/-Leu/-Trp
DO Supplement-His/-Leu/-Trp/-Ura
DO Supplement-His/-Leu/-Ura
DO Supplement-His/-Trp/-Ura
DO Supplement -His/-Ura
DO Supplement-Leu/-Met/-Trp
DO Supplement -Leu/-Trp
DO Supplement-Leu/-Trp/-Ura
DO Supplement -Met/-Trp
DO Supplement -Trp
DO Supplement -Trp/-Ura
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder

 酵母单杂交早是1993年由Li等从酵母双杂交发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测某些转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和性,现已被用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的某些转录因子。

 酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理,克隆与靶元件结合的转录因子基因(cDNA)的方法。其理论基础是:许多真核生物的转录子由物理和功能上的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录区(Activation domain AD)组成,因此可构建基因与AD的融合表达载体,在酵母中表达为融合蛋白时,根据报道基因的表达情况,便能筛选出与靶元件有结合区域的蛋白。理论上,在单杂交检测中,靶元件都可被用于筛选一种与之有结合区域的蛋白。

 
双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录因子的参与。80年代的工作表明, 转录因子在结构上是组件式的(modular), 即这些因子往往由两个或两个以上相互的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNA binding domain,简称为BD)和转录结构域(activation domain,简称为AD),它们是转录因子发挥功能所的。单独的BD虽然能和启动子结合,但是不能转录。而不同转录因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并转录。

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