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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液
英文名:1M Sorbitol Solution
描述:
1M的山梨醇一般用于酿酒酵母或者裂殖酵母电转感受态的制备。
酵母感受态细胞的制备:
1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。
3.把酵母细胞接种到50 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到1.3-1.5范围内。
4.将酵母菌置于冰上放置10 min后,收集细胞。1000 g,离心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的预冷的无菌水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。重复洗涤2次。
6.沉淀用5mL 冰上预冷的1M 山梨醇溶液重悬。1000 g,离心5 min,去上清。
7.沉淀用0.4 mL 的预冷的1M 山梨醇溶液重悬,按照40 uL 分装。
酵母转化:
1.在40uL 的酵母感受态细胞中,加入5uL(100ng)的质粒,混匀。
2.转移到预冷的电转槽中,电击。
3.在电转槽中加入500uL 预冷的1M 山梨醇溶液,轻柔混匀。
4.涂布于相应的筛选培养基上,28-30℃培养3-5天。
供应产品列表:
DO Supplement -Ade |
DO Supplement -Ade/-His |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Met |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura/-Met |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Ura |
DO Supplement -Ade/-His/-Met |
DO Supplement -Ade/-His/-Trp |
DO Supplement -Ade/-His/-Ura/-Trp |
DO Supplement -Ade/-Leu |
DO Supplement -Ade/-Leu/-His |
DO Supplement -Ade/-Leu/-Trp |
DO Supplement -Ade/-Leu/-Ura |
DO Supplement -Ade/-Trp |
DO Supplement -Ade/-Ura |
DO Supplement -Arg |
DO Supplement -Arg/-His/-Leu/-Lys/-Ura |
DO Supplement -Arg/-Leu/-Ura |
DO Supplement -Cys/-Met |
DO Supplement -Cys/-Met/-Ura |
DO Supplement -Cys-His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Glu/-Ura |
DO Supplement -His |
DO Supplement -His/-Leu/-Lys |
DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Met/-Ura |
DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Ura |
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Ura |
双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录因子的参与。80年代的工作表明, 转录因子在结构上是组件式的(modular), 即这些因子往往由两个或两个以上相互的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNA binding domain,简称为BD)和转录结构域(activation domain,简称为AD),它们是转录因子发挥功能所的。单独的BD虽然能和启动子结合,但是不能转录。而不同转录因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并转录。
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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液