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DNA合成氨气氨解仪是为有效制备生物样品而设计的,用于PCR引物、探针和组分生产,DNA测序、DNA和RNA合成、随机启动、载体设计、DNA指纹和人工基因合成。是DNA/RNA/寡核苷酸脱保护基快捷高效稳定的解决方案。
DNA合成氨气氨解仪特点:
反应器容量:10升容量
样品数量:6至10个,每个样品有96位。
温度范围:*200°C
功率输出:1200瓦
符合CE标志
保修12个月
电源:220 V至240 V/50/60 Hz
*功耗:2500瓦
显示屏:彩色触摸屏
尺寸:W x D x H 52 x 73 x 123厘米(无终端)
重量:180公斤
采用Oligo高压微波氨解仪,一次性可以氨解960个样品并直接得到干燥的样品,氨解时间也大大缩短。
传统的氨解步骤如下,费时费力:
一. 氨解前的准备
1. 检查纯化所需材料及试剂是否充足。、
2. 活化C18板(柱) 向C18板加满0.5M NaCl,抽干,重复平衡3次,再加满分析纯,抽干5次以上,后以洗脱速度离心。洗脱后再向C18板内加满0.5M NaCl,抽干,重复3次,完毕再向C18板内加满0.5M NaCl以待用。C18柱活化,首先用20ml分析纯活化C18一次,吹干甲醇,然后用10ml NaCl平衡1次以待用。
3.制板灌胶 计算好预用分析板及电泳板数量以灌胶。胶液制作,每块板需50ml左右的16%的胶(短链,16%;长链,12%),每块板平均加入过硫酸铵100ul,TEMED 30ul(依情况而定,可适量增减),摇晃,混匀,倒入板中,水平放置,使胶凝固。注意板中不能有气泡,并注意补胶。
注意事项:①所用C18板需定期进行维护与检测。
②每一瓶新制胶使用之前需对胶跑Marker以保能正常使用。
二. 氨解
原理:切割—将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。用冰氨水来裂解CPG
连接化合物与初始核苷间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3‘羟基。
脱保护基—用冰氨水处理较长时间以脱掉碱基环上的氰乙基、苯甲酰基、异丙基等保护基团。
1. 单管氨解
① 将合成好的柱子用注射器针头将CPG或树脂粉末全部倒入氨解瓶中,并将对应的标签贴在氨解瓶上。
② 加入冰三乙胺100ul,冰氨水1.5ml,盖紧瓶盖,放入80度烘箱氨解2小时。对用快速氨解单体合成的序列直接加氨水后55度2小时即可。在生产操作表上准确记录开始氨解的时间。
注意事项:①在将引物放入氨解瓶时,要核对清楚标签,要一一对应。
②三乙胺与氨水顺序要防止加反。(加反后会出现分层现象)
③氨解中使用的氨水必须是冰冻状态中的氨水。
2. 96孔板氨解
①55度氨解
对好标签,向合成板内加入适量的乙氰放在垫板上,重量平衡,高速离心。(对于3900,离心完后需用注射器针头将砂芯勾出)离心完后,将垫板换成正面贴有对应轮次标签的氨解板上。放入通风橱。先向合成板每孔加入50ul三乙胺,再向每孔加入250ul氨水,用胶带封好放入氨解盒中,在操作单上登记好时间和氨解人,放入55度烘箱氨解40min。
②80度氨解
40min后取出,放入通风橱赶氨1min,高速离心。拿去合成板用20ul小枪取小样20ul;在向氨解板每孔内加入冰氨水200ul,封好胶带,用夹板夹好,登记好时间,放入80度烘箱氨解2h。
注意事项:①务必在氨解板正面贴上该轮次标签,然后再位置一一对应垫再合成板下面,一起氨解,离心。
②三乙胺与氨水顺序要防止加反。(加反后会出现分层现象)
③氨解中使用的氨水必须是冰冻状态中的氨水。
④夹板密封时要注意拧紧,防止出现漏氨。