产品属性：

名称    5637 (人膀胱癌细胞) (STR鉴定正确)    

种属    人类     

生长特性    贴壁细胞    

细胞形态    上皮细胞样    

背景描述    5637细胞能生成SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。    

生物安全等级    1    

生长培养基    RPMI-1640(PM150110)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)    

推荐传代比例    1:3-1:4    

推荐换液频率    2~3次/周    

倍增时间    ~24-36小时    

冻存条件    冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮    

培养条件    气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃    

致瘤性    Yes, within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.    

注意事项    该细胞较难消化，注意延长消化时间，消化到细胞收缩变圆，轻拍培养瓶侧边，细胞可以滑落方可终止消化。   

保藏机构    ATCC; HTB-9 DSMZ; ACC-35    

冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

猪疱疹病毒(PHV)核酸检测试剂盒    48T    

猪圆环病毒通用型(PCV-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪圆环病毒通用型(PCV-U)核酸检测试剂盒    48T    

猪圆环病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪圆环病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸检测试剂盒    48T    

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸检测试剂盒    48T    

猪乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

猪水泡性口炎病毒(VSV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪水泡性口炎病毒(VSV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

传染性胃肠炎病毒(PTGV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

传染性胃肠炎病毒(PTGV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

水泡病毒(SVDV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

水泡病毒(SVDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

传染性胸膜肺炎(APP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

传染性胸膜肺炎(APP)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

猪内源性逆转录病毒(PERV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)    48T    

猪内源性逆转录病毒(PERV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)    48T    

腺苷A1A受体抗体    

芳基硫酸酯酶B抗体    

γ氨基丁酸转氨酶抗体    

共济失调蛋白2结合蛋白1抗体    

肿瘤坏死因子α转换酶    

芳香烃受体核转录蛋白2抗体    

AlkB同源蛋白8抗体    

ABI基因家族成员3结合蛋白抗体    

游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒    

游离睾酮(F-TESTO)ELISA试剂盒    

游离蛋白S(FP-S)ELISA试剂盒    

游离雌三醇(FE3)ELISA试剂盒    

游离β绒毛膜促性腺激素(f-βhCG)ELISA试剂盒    

幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒    

幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)ELISA试剂盒    

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA试剂盒    

优球蛋白(EL)ELISA试剂盒    

硬骨素(SOST)ELISA试剂盒    

5637 (人膀胱癌细胞)印度刺猬因子(IHH)ELISA试剂盒    

隐热蛋白(NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1)ELISA试剂盒    

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)ELISA试剂盒    

音猬因子N端(Shh-N)ELISA试剂盒    

音猬因子(SHH)ELISA试剂盒