常规PCR Kit （一步法）

Venor®Gem OneStep

常规PCR Kit（一步法）介绍：

常规PCR法：是根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出诊断。

优点：①灵敏度高，特异性好。②时间短，2-3小时出结果。③符合欧洲药典。④操作简单。

缺点：①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）。②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。

『支原体常规PCR检测试剂盒』介绍：

德国MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒，依据操作步骤的细微差别，分一步法和经典法两类。此两类试剂盒较全球其他厂家同类产品，具有以下*的优点：

①高特异性，270bp左右的一条阳性对照条带，涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种，操作简单，结果易于观察。（使用MB的试剂盒，下表列出的支原体物种均为阳性，其他微生物或真核细胞均为阴性。根据16s rRNA序列的同源性比对，该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体。）

②高灵敏度，1-5拷贝/μl的支原体DNA即可检出。

③试剂盒含内控对照，可防止假阴性的发生。

④符合欧洲药典要求。

常规PCR Kit（一步法）适用范围：

A. 科研用户，细胞上清的筛查可选用MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒（一步法）。（详见下文）

【Venor® Gem OneStep (货号:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (货号: 11-7096)】

B. 对于需遵循药典要求的生物制药企业，可选用MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒（经典法）。

【Venor® Gem Classic(货号: 11-1050) 】+ Taq酶  (货号: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic  (货号: 11-1050G)】

特点：

1. 内控对照已加在预混液中，无需另外配置，使用便捷。
2.高特异性，仅一条阳性对照条带，即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。

操作简单，易于观察。

3.高灵敏度，1-5拷贝/μl的支原体DNA即可检出。
4.欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体。

操作步骤：

下列图示以Venor® Gem OneStep
支原体
常规PCR
检测试剂盒
(一步法)( 货号：11-8050)  为例，具体产品操作以说明书为准。

第1步：样本处理

第2步：试剂制备

第3步：PCR体系建立

第4步：启动PCR反应

第5步：电泳结果分析

191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。

当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞103拷贝）。

阳性对照中支原体DNA＞104拷贝，内控对照条带会*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的条带，此条带不影响检测结果。

如果待测样本对PCR产生抑制，则内控对照条带变弱（和阴性对照相比），此时应先进行DNA抽提（推荐使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原体DNA抽提试剂盒），然后再检测。

储存条件

2~8℃至少12个月。复溶后必须在-18℃保存。

效期

1年6个月