支原体常规PCR检测试剂盒（不含Taq酶）

10种常见支原体检测限

支原体常规PCR检测试剂盒（经典法）（不含Taq酶）操作步骤

第1步：样本处理

a. 细胞培养上清

b. 生物药或需遵循药典的样本

说明：①样品基质可能会影响检测的灵敏度。收集和筛选更高的样品量可提高测定灵敏度。

  ②细胞培养物样本含丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原DNA，影响检测灵敏度。

建议：样本做DNA抽提处理，实现高灵敏度。

推荐：德国MB公司生产的支原体DNA提取试剂盒，Venor® Gem Sample Preparation Kit。该DNA抽提试        剂盒已经过广泛验证。

第2步：试剂制备

第3步：PCR体系建立

a. 细胞培养上清

b. 生物药或需遵循药典的样本

第4步：启动PCR反应

第5步：电泳结果分析

191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。

当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞103拷贝）。

阳性对照中支原体DNA＞104拷贝，内控对照条带会*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的条带，此条带不影响检测结果。

如果待测样本对PCR产生抑制，则内控对照条带变弱（和阴性对照相比），此时应先进行DNA抽提（推荐使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原体DNA抽提试剂盒，然后再检测。