如何优化mIHC结果：不可忽视的抗体稀释液
时间：2024-10-18 阅读：265
在多重荧光免疫组化(mIHC)实验中，选择正确的一抗至关重要，但实验中一些常被忽视的小步骤，如抗体稀释液的选择，实际上对实验成败起着决定性作用。本文将探讨如何通过选择合适的抗体稀释液来优化mIHC结果。
抗体稀释液的重要性
抗体稀释液不仅影响抗体与靶标的特异性相互作用，还影响抗体的稳定性。常用的稀释液包括PBST、TBST、PBS和TBS等。了解它们的区别对于精准选择至关重要。
缓冲液成分对比
缓冲液 | 组成成分 |
PBST | Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl, Tween-20 |
PBS | Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl |
TBS | NaCl, KCl, Tris-base |
TBST | NaCl, KCl, Tris-base, Tween-20 |
PBS与TBS的区别
1）PBS：基于磷酸盐的缓冲体系，pH稳定性好，但可能与重金属离子形成沉淀，影响部分生化反应。
2）TBS：基于Tris-base的缓冲体系，对生化反应的干扰小，但pH易受环境和稀释倍数影响。
Tween-20在mIHC中的作用
Tween-20是一种非离子型表面活性剂，能增加抗体与组织的接触面积，提高抗体的复性抗原能力，从而增强特异性结合。
抗体稀释液的选择
1）PBS：适用于大多数实验场景，包括洗涤和培养。
2）TBS：对抗体的干扰小，适合作为抗体稀释液。
3）TBST：含有Tween-20，适合作为mIHC实验中的抗体稀释液。
封闭试剂的作用
封闭试剂，如与二抗同一来源的封闭血清或BSA，可以减少非特异性结合，提高抗体的特异性。如爱必信的多色试剂盒的二抗种属来源就是山羊，那么就可以用爱必信的山羊血清（货号：abs933）作为封闭剂。
结论
选择合适的抗体稀释液对于获得wan美的mIHC结果至关重要。如果您的mIHC结果不尽如人意，建议尝试更换抗体稀释液以优化实验结果。
多色常用试剂推荐：
分类 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
固定 | abs9179 | 4%多聚甲醛(通用型组织固定液) | 500mL |
包埋(冰冻样本) | abs9756 | OCT包埋剂 | 110mL |
抗原修复(石蜡切片) | abs9342 | Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0) | 100mL |
abs9248 | 柠檬酸钠抗原修复液(50×) | 100mL | |
抗体洗脱(无法采用热修复进行洗脱的样本，如细胞、冰冻、骨组织等) | abs994 | 抗体洗脱液(mIHC专用) | 30mL |
细胞通透(胞内指标需要) | abs9149 | 曲拉通X-100 | 100mL |
淬灭内源性过氧化物酶 | abs9333 | 过氧化物酶封闭液(H2O2法) | 100mL |
免疫组化笔 | abs929 | 免疫组化笔plus:abs9785(蜡性) | 1支 |
封闭(二抗同来源血清) | abs933 | 山羊血清 | 50mL |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗体稀释液 | abs9299 | 一抗二抗稀释液 | 100mL |
缓冲液 | abs952 | TBST(10×) | 500mL×2 |
abs9340 | PBST(1×,pH7.4) | 500mL |
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