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如何优化mIHC结果:不可忽视的抗体稀释液

时间:2024-10-18      阅读:169

在多重荧光免疫组化(mIHC)实验中,选择正确的一抗至关重要,但实验中一些常被忽视的小步骤,如抗体稀释液的选择,实际上对实验成败起着决定性作用。本文将探讨如何通过选择合适的抗体稀释液来优化mIHC结果。

 

抗体稀释液的重要性

抗体稀释液不仅影响抗体与靶标的特异性相互作用,还影响抗体的稳定性。常用的稀释液包括PBST、TBST、PBS和TBS等。了解它们的区别对于精准选择至关重要。

 

缓冲液成分对比


缓冲液

组成成分

PBST

Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl, Tween-20

PBS

Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl

TBS

NaCl, KCl, Tris-base

TBST

NaCl, KCl, Tris-base, Tween-20




 

PBS与TBS的区别

1)PBS:基于磷酸盐的缓冲体系,pH稳定性好,但可能与重金属离子形成沉淀,影响部分生化反应。

2)TBS:基于Tris-base的缓冲体系,对生化反应的干扰小,但pH易受环境和稀释倍数影响。

 

Tween-20在mIHC中的作用

Tween-20是一种非离子型表面活性剂,能增加抗体与组织的接触面积,提高抗体的复性抗原能力,从而增强特异性结合。

 

抗体稀释液的选择

1)PBS:适用于大多数实验场景,包括洗涤和培养。

2)TBS:对抗体的干扰小,适合作为抗体稀释液。

3)TBST:含有Tween-20,适合作为mIHC实验中的抗体稀释液。

 

封闭试剂的作用

封闭试剂,如与二抗同一来源的封闭血清或BSA,可以减少非特异性结合,提高抗体的特异性。如爱必信的多色试剂盒的二抗种属来源就是山羊,那么就可以用爱必信的山羊血清(货号:abs933)作为封闭剂。

 

结论

选择合适的抗体稀释液对于获得wan美的mIHC结果至关重要。如果您的mIHC结果不尽如人意,建议尝试更换抗体稀释液以优化实验结果。

 

多色常用试剂推荐:


分类

货号

产品名称

规格

固定

abs9179

4%多聚甲醛(通用型组织固定液)

500mL

包埋(冰冻样本)

abs9756

OCT包埋剂

110mL

抗原修复(石蜡切片)

abs9342

Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)

100mL

abs9248

柠檬酸钠抗原修复液(50×)

100mL

抗体洗脱(无法采用热修复进行洗脱的样本,如细胞、冰冻、骨组织等)

abs994

抗体洗脱液(mIHC专用)

30mL

细胞通透(胞内指标需要)

abs9149

曲拉通X-100

100mL

淬灭内源性过氧化物酶

abs9333

过氧化物酶封闭液(H2O2法)

100mL

免疫组化笔

abs929

免疫组化笔plus:abs9785(蜡性)

1支

封闭(二抗同来源血清)

abs933

山羊血清

50mL

abs9157

牛血清白蛋白

100g

抗体稀释液

abs9299

一抗二抗稀释液

100mL

缓冲液

abs952

TBST(10×)

500mL×2

abs9340

PBST(1×,pH7.4)

500mL




 

Absin产品线:

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