一、BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒内容

该试剂盒内含：1 E18小鼠全脑、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1个带橡胶球的火抛光移液、1对PDL涂层盖板

二、BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒产品简介

该试剂盒包含从新鲜组织开始培养所需的一切。E18组织用2ml含B27的THRYVE胚胎储存介质运送。立即使用组织以获得最高的细胞产量，但组织可在4-8°C下保存一周。这个试剂盒是完mei的研究人员刚刚开始或为那些谁想要的可靠性。非常适合课堂教育，为下一代研究人员提供实践方法。

三、产品操作

（1）细胞分散（无菌操作箱中的室温）

A、用 2 毫升移液管小心地将组织转移至木瓜蛋白酶中，尽量减少培养基的转移。将 THRYVE 胚胎完quan培养基转移至一个新的无菌 15 毫升管中，以备第三步使用。

B、将组织和木瓜蛋白酶在30℃下孵育 10 分钟。每 2 分钟轻轻搅拌一次，或者使用加热振荡板，温度为30℃，转速为 150 转/分钟。

C、用 2 毫升移液管从木瓜蛋白酶中取出含有少量培养基的组织，并返回步骤 A中的 THRYVE 胚胎完quan培养基中。

D、使用涂有硅油的巴斯德移液管，研磨组织不超过 10 次，或分散 90%的组织，避免产生气泡。

E、让未分散的颗粒静置 1 分钟。可选：向细胞悬液中加入 400 微升 1 毫克/毫升的 DNase I 溶液，并在室温下孵育 15 分钟，每 5 分钟轻轻搅拌或摇晃试管。

F、将含有分散细胞的细胞悬液转移到无菌的 15 毫升管中。留下约 50 微升含有碎片的 THRYVE 胚胎完quan培养基。可选：通过 70 微米的细胞过滤器过滤细胞溶液。

G、以 1100 转/分（200×G）离心 1 分钟。弃去上清液，留下约 50 微升含有沉淀物的 THRYVE 胚胎完quan培养基。

H、分散细胞团（用手指或试管轻弹管底），然后将细胞团重新悬浮于 1 毫升的星形胶质细胞培养基（NbAstro™）中。

I、将 20 微升细胞溶液分装到含有 80 微升台盼蓝（1:5 稀释）的 0.5 毫升管中。

J、使用血细胞ji数器（计算细胞/毫升）或采用当前的实验室程序来计数细胞。 （2）细胞培养（无菌室中的室温）

A、用 0.2 毫升/平方厘米的 NbAstro™ 稀释细胞，并以 7500 个细胞/平方厘米或期望的浓度进行铺板。注意：以更高的密度铺板会导致神经元和星形胶质细胞的混合。

B、孵化时间37 ℃、5%的二氧化碳2、9%的氧气2、95%的湿度（或环境湿度O2 )）

C、 每 3 - 4 天用新鲜的、37℃、二氧化碳平衡的 NbAstro 更换一半的培养基。

D、1.5 至 2 周后，星形胶质细胞将有 90%融合，准备收获或传代。

E、若要转移到神经元培养物中：提前 24 小时，将一半的培养基更换为 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™（NbActiv1™）。

F、对于扩增：用 0.25%胰蛋bai酶在 THRYVE 胚胎培养基中收获细胞，(37 ℃，5 分钟）。

G、若要抑制胰dan白酶，请使用dan蛋白酶抑制剂或血清。

（3）活力测定：

A、用 37 ℃平衡yan溶液（0.2 毫升/平方厘米底物）冲洗两次。

B、从 15mg/ml 荧光素二乙酸酯的丙酮储备液和 4.6mg/ml 碘化丙啶的水溶液储备液中制备染色液，将每种溶液稀释 15 微升至 1.5 毫升的 HBSS 中（1:100 稀释）。

C、将步骤 B 中的 20 微升染料混合物添加到步骤A中添加的每 0.2 毫升的 HBSS 中（1:10 稀释）。

D、约 1 分钟后，使用适合荧光素荧光的蓝色激发来计数活细胞（绿色细胞）。使用绿色激发来计数碘化丙啶荧光（小红色细胞核）的死细胞。

E、活力 =（绿色细胞/单位面积）/（单位面积上铺板的总细胞数） 或者存活率 = 绿色细胞/（绿色细胞 + 红色细胞）