微生物菌种安瓿管或冻存管的准备

宜选用耐温度骤变，耐压，管壁厚度均一并且为中性玻璃的安瓿管，或螺旋口的塑料冻存管。注意玻璃管不能有裂纹。清洗安瓿管时，先用2％盐酸浸泡过夜，然后用自来水冲洗3次以上，zui后用蒸馏水冲洗、浸泡至pH中性，然后干燥。塑料冻存管用蒸馏水浸泡、冲洗干净、干燥即可，然后在121％下高压灭菌15—20min备用。

标签的准备

使用标签机在耐低温标签纸上打印菌种编号、保藏日期，大小为lcm×3cm左右，然后贴在安瓿管上。或采用非水溶性记号笔，记录菌种编号、保藏日期。

保护剂的选择与准备

保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度，一般采用10％一20％甘油。参见附录B《常用保护剂》。

菌种的准备

微生物的生理状态对液氮保藏的存活率有影响，一般采用对数生长期的中期或后期的培养物。菌种制备有多种方法，参见附录c《菌种的准备》。

菌液分装

菌液分装参见4 6菌液分装与加棉塞。若用安瓿管分装菌液，在分装完毕后应在距管口5cm左右用喷射火焰(喷灯、焊枪等)将其熔封，若用冻存管分装的，应立即拧紧螺帽。

微生物菌种预冻

预冻时，冷冻速度一般控制在每分钟下降1℃，zui后冻结温度低于共晶点温度10℃左右即可。

保藏

将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相温度为一150℃，液相温度为一196℃。

保藏周期

一般10年以上。

适用范围

各类微生物。

液氮保藏应注意事项

·防止操作人被冻伤，操作时应注意安全，戴面罩及皮手套；

·若用塑料冻存管保藏，一定要拧紧螺帽；

·运送液氮时一定要用特制的容器，绝不可用一般密闭容器存放或运输液氮，切勿使用保温瓶存放液氮；

·微生物菌种存放液氮容器的室内要注意通风，防止过量氮气使人窒息；

·防止安瓿管破裂爆炸。如液氮渗人安瓿管内，当从液氮容器中取出时，液态氮体积将膨胀约680倍，爆炸力很大，要特别小心；

·注意观察液氮容器中液氮的残存量，定期填充液氮。