产品名称：EZ®细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒

英文名称：EZ Cell and Tissue DNA Direct PCR Kit

产品规格：50T/200T

产品价格：420/1350元

试剂盒应用：

动物组织或细胞DNA的扩增与克隆、转基因细胞株筛选、DNA病毒基因扩增、DNA病毒普通PCR诊断、DNA病毒Real-time PCR诊断（Taqman法）等。

试剂盒组成：

DNA-EZ-1、DNA-EZ-2、DNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O

保存条件：

-20ºC保存。使用前将DNA-EZ-1、DNA-EZ-3在室温或37ºC充分溶解。DNA-EZ-2和2×TaqMix需置于冰上。

EZ®细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒使用方法：

1、细胞或组织样品中DNA的扩增

1 将DNA-EZ-1与DNA-EZ-2以5：1的比例充分混合。

2 取20 µL细胞样品（105-106 cells/mL）或研磨的组织样品，加入6 µL上述混合液，混匀。

3 置于50ºC静置10分钟后，再置于95ºC加热10分钟。

4 加入50 μL的DNA-EZ-3，混匀。

5 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。

2、组织块中DNA的扩增

1 用H2O将DNA-EZ-1稀释5倍，每25 μL的DNA-EZ-1稀释液加入1 μL的DNA-EZ-2，混合均匀。

2 切取半颗米粒大小的组织块（< 3 mm3），并*浸入上述混合液中。

3 50ºC加热30分钟，每隔10分钟取出混匀一次。

4 95ºC加热10分钟。

5 加入50 μL的DNA-EZ-3，混匀。

6 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。

3、Real-time PCR

取上述细胞或组织处理液，加入特异性引物和Taqman探针，可进行特异性靶标DNA的定量检测。

取上述细胞或组织处理液，加入SYBR Green PCR试剂（需自备），可进行特异性靶标DNA的相对定量检测。

4、PCR加样体系

5、PCR程序设定

注意事项

（1）取样的细胞量应当适中，浓度不宜过高或过低，处理后溶液应当以透明为宜。

（2）样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐设置阴性对照参与处理过程，以检测环境的污染。

（3）PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5ºC，或者通过梯度PCR摸索较佳退火温度。

（4）上述步骤同样适用于相应的细胞或组织中DNA病毒的PCR诊断。在进行组织中DNA病毒的诊断时，为保证准确度，推荐将病料组织研磨后再进行上述处理和扩增。

（5）TaqMix中加入了染料和相应试剂，普通PCR后可直接进行电泳，无需另加Loading buffer。

（6）处理96孔板中的细胞时，可如“组织块DNA扩增”第1步中的方法，配置裂解液后，使用排枪直接加入96孔板裂解细胞，实现高通量操作。

（7）TaqMix中的染料不影响Taqman探针的效果。

 应用案例：细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒

 细胞中疱疹病毒基因的直接扩增。取病毒细胞培养液40ul，用EZ010试剂盒进行直接扩增，其中1971bp的片段G+C含量大于75%，结果表明，用该方法可直接扩增细胞中近2000bp的DNA片段。

 某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释，用EZ010试剂盒处理后，加入特异性Taqman探针，进行qPCR扩增，检测曲线呈现明显的梯度关系，样品间重复性良好，Ct值线性模拟R2=0.9978