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Azaood-Fetal Bovine Serum(Standard South American
面议Azaood-Fetal Bovine Serum( New Zealand Origin)
面议Fast One Step Cloning Kit
面议Universal SYBR Green qPCR Mix
面议All-in-One RT SuperMix for qPCR试剂
面议ESF 921昆虫细胞培养基
面议线性PEI 转染试剂
面议ES培养基昆虫及哺乳动物细胞
面议培养基Helios UltraGRO 血清替代物
面议预染蛋白Marker26617试剂
面议线性PEI转染试剂- KE1082
面议杂交瘤细胞无血清培养基
面议产品名称:EZ®小鼠组织DNA直扩PCR试剂盒
英文名称:EZ Mouse DNA Direct PCR Kit
产品规格:50T/200T
产品价格:420/1350元
试剂盒应用:转基因小鼠、基因缺失小鼠鉴定。
试剂盒组成:MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-2、MuDNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存条件:-20ºC保存。使用前将MuDNA-EZ-1、MuDNA-EZ-3在室温或37ºC充分溶解。MuDNA-EZ-2、2×TaqMix使用时需置于冰上。
使用方法:
(1)将MuDNA-EZ-1和MuDNA-EZ-2以25:1的比例混合均匀,并分装每管26µL。
(2)剪取小鼠尾巴1-3毫米,*浸入上述溶液中。
(3)置于50ºC加热30分钟。
(4)置于95ºC加热10分钟。
(5)加入50µL MuDNA-EZ-3。
(4)取上述处理液进行PCR扩增。
推荐的PCR加样体系
成分 | 总20 μL体系 |
2×TaqMix | 10 μL |
上游引物(10 μM) | 1 μL |
下游引物(10 μM) | 1 μL |
模板DNA | 2 μL |
H2O | 6 μL |
PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 oC | 5 min |
|
变性 | 94 oC | 30 s |
30-35 |
退火 | 50~72 oC | 30 s | |
延伸 | 72 oC | 1 kb/min | |
终延伸 | 72 oC | 10 min |
|
| 4 oC | Hold |
|
EZ®小鼠组织DNA直扩PCR试剂盒注意事项
(1)剪取不同小鼠尾巴时,应当更换剪刀,用过的剪刀经过84消毒液浸泡和净水清洗后再使用。
(2)应当设置野生型小鼠的对照。
(3)PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5ºC,或者通过梯度PCR摸索较佳退火温度。
(4)TaqMix中加入了染料和相应试剂,PCR后可直接进行电泳,无需另加Loading buffer。
A129小鼠(JAX number:010830)的鉴定。取2mm鼠尾,用EZ011试剂盒进行直接扩增,A129小鼠出现250bp条带,而野生小鼠呈现155bp条带,说明该小鼠为纯合的突变子。
SYISL缺失小鼠(PNAS,2018)的鉴定。取2mm鼠尾,用EZ011试剂盒进行直接扩增,野生小鼠出现1500bp条带,SYISL缺失小鼠出现455bp条带,说明该小鼠为纯合的突变子。