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适合用于常规细胞原代细胞以及干细胞的培养
内毒素含量极低 <3EU/ml(规定:特级胎牛血清<10 EU/ml)
极利于细胞的生长和传代 ,适合各种细胞培养
七次无菌过滤,zui后三次为0.1 µm无菌过滤处理
进行细菌、真菌、支原体、病毒及病毒抗体检测,符合动物协会要求
细胞介绍
该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用,无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。
细胞特性
1. 来源:急性单核细胞白血病,单核细胞
2. 形态:单核细胞,悬浮
细胞培养步骤
【细胞货号】 C5003
【细胞缩写】 RAW 264.7细胞
【细胞名称】 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
【背景资料】 此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。 LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
【组织来源】 Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
【细胞形态】 不规则圆形
【细胞特性】 贴壁
【细胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
【培养条件】 详见细胞说明书
【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】 详见细胞说明书
【主要文献】 请具体查阅相关发表文章
血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?
沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。
如何避免血清中产生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的产生:
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或*没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。
若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好,反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持PH值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
(5) 掌握细胞传代的时机,细胞切勿生长过老。
适合用于常规细胞原代细胞的培养
内毒素含量极低 <3EU/ml(规定:特级胎牛血清<10 EU/ml)
极利于细胞的生长和传代 ,适合各种细胞培养
七次无菌过滤,zui后三次为0.1 µm无菌过滤处理
进行细菌、真菌、支原体、病毒及病毒抗体检测,符合动物协会要求
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的
牛血清是细胞培养中用量zui大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
1、如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性,若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。
2、总蛋白含量
胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采血的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。
3、血红蛋白
标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高,反之,数值越低。
4、pH
国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。
5、微生物
包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高,细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制,支原体经过0.1um过滤,大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的,主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难*清除,但对血清质量影响不大。病原性病毒,特别是BVDV,在国产血清中几乎90%以上都存在,这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一,而进口胎牛血清中基本都控制的很好。
6. 免疫球蛋白
国产血清的只是定性检测,结果也很不准确,进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能*体现出采血的时的牛龄情况,国产血清,基本都是新生牛的,血清中容易产生IgM,IgG的含量也偏高,进口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低。
不管是国产还是进口血清,都是不测抗生素的(无四环素胎牛血清除外)。国外,抗生素的使用很严格,用量也很少,每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低;国内,抗生素的滥用已成了普遍现象,国产血清中残留很高,对细胞培养极为不利,这是国产血清质量差的根本原因。
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