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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称 | 规格 | 货号 |
48T 0.2PCR管 | FS-02R6392 |
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例) 1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。 2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。 3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。 4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 | 二、样品DNA的制备 8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取, 多出的一个是PC(样品制备阳性对照), 一个是NC(样品制备阴性对照)。 可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。 9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒。 | 三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行) 10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。 11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
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实验外包:
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
Nox-4/NADH /FITC 荧光标记NADPH氧化4抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Torc2/Crtc2/FITC 荧光标记CREB转录共激活因子TORC2抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
胆囊收缩抗体/缩胆囊抗体 CCK8 0.1ml
Goat Guinea pig IgG/Cy5 Cy5标记的羊抗豚鼠IgG 0.1ml
phospho-FADD (Ser194) 磷化Fas死亡结构域相关蛋白抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh PNPT1 多核苷磷化蛋白抗体 0.2ml
Torc2/Crtc2/FITC 荧光标记CREB转录共激活因子TORC2抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
IL-11(Human Interleukin 11) ELISA KIT 人白介11Multi-class antibodies: 48T
GRK1 G蛋白偶合受体激1抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MOG 髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白抗体 0.1ml
GTE-AGE(Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人肾小球组织糖基化终末产物 96T
Rho GTPase activating protein 29 Rho GTP激活蛋白29抗体 0.2ml
Phospho-c-Kit(Tyr703) 磷化原癌基因c-kit抗体 0.1ml
GRK1 G蛋白偶合受体激1抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit Goat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗羊IgG 0.1ml
GABRA6 G基丁A型受体α6/GABAA Rα6抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADM (ProAM-N20) 肾上腺髓质抗体(N端20肽) 0.1ml
HRH3/GPCR97/FITC 荧光标记组织胺H3受体抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgM/PE PE标记的兔抗鸡IgM 0.1ml
Synaptopodin/FITC 荧光标记突触极蛋白synaptopodin抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
羊源性成分核酸检测试剂盒48T0.2PCR管三棱Rhizoma sparganii
绵萆薢Dioscorea septemloba Thunb
红参芦Red ginseng?reed
豨莶草(腺梗豨莶)Herba Siegesbeckiae?(Siegesbeckia pubesce
玉竹Polygonatum odoratum
葛根Ge Gen
高丽红参Korea ginseng
西藏棱子芹Tibet?shuttle?Qin
火炭母Chinese knotweed
白前The white front
老鹤草Cranesbill
川射干Iris tectorum Maxim
仙茅Curculigo orchioides
铁扫帚Iron broom
虎杖叶The leaves of Polygonum cuspidatum Sieb
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。