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注意事项
1.公司产品仅用于科研整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
参数规格:
产品货号:FS-02R6361
产品规格:48T 0.2PCR管
产品分类:PCR-荧光探针法/PCR法
产品运输:低温运输
实验过程:
一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 |
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
Mitofilin/IMMT /FITC 荧光标记线粒体内膜蛋白抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
TRA16 /FITC 荧光标记受体相关蛋白/孤儿受体相关蛋白抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABI3BP ABI基因家族成员3结合蛋白抗体 0.2ml
Rabbit Avidin/Cy3 Cy3标记的兔抗亲和 0.1ml
Phospho-Gab1 (Tyr659) 磷化接头蛋白Gab 1抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Avidin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗亲和 0.1ml
TRA16 /FITC 荧光标记受体相关蛋白/孤儿受体相关蛋白抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
IL-3(Human Interleukin 3) ELISA KIT 人白介3Multi-class antibodies: 48T
UTS2R G蛋白偶联受体14抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的小鼠抗IgG 0.1ml
RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人类风湿因子 96T
RIMS3 神经元突触膜胞外分泌调节蛋白3抗体 0.2ml
C20orf111 诱导转录蛋白1抗体 0.2ml
UTS2R G蛋白偶联受体14抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit dog IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗狗IgG 0.1ml
GMF beta 胶浆成熟因子β抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADCY9 腺苷环化9抗体 0.2ml
LRP6/FITC 荧光标记低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗鸡IgM 0.1ml
Phospho-TAK1 (Ser412)/FITC 荧光标记磷化转化生长因子β活化激1抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒48T 0.2PCR管通用AP联检测封闭溶液100毫升小鼠结蛋白elisa检测试剂盒
同位标记试剂专题小鼠热休克蛋白90elisa检测试剂盒
名称小鼠甲状腺过氧化物elisa检测试剂盒
DNA探针同位([α32P]dCTP)聚合整合标记试剂盒20次小鼠转铁蛋白受体elisa检测试剂盒
5’末端DNA探针同位([γ32P]ATP)标记试剂盒20次小鼠酯转移蛋白elisa检测试剂盒
RNA探针同位([α32P]CTP)聚合标记试剂盒20次小鼠膜联蛋白Ⅴelisa检测试剂盒
[35S]-Met细胞代谢标记试剂盒20次小鼠视黄醇结合蛋白elisa检测试剂盒
[35S]-Cys细胞代谢标记试剂盒20次小鼠心钠肽elisa检测试剂盒
GST融合蛋白同位([γ32P]ATP)标记试剂盒20次小鼠降钙elisa检测试剂盒
GST融合蛋白同位([γ32P]GTP)标记试剂盒20次小鼠β内啡肽elisa检测试剂盒
3’末端RNA探针同位([α32P]dATP)聚合标记试剂盒20次小鼠血管舒缓肽elisa检测试剂盒
3’末端RNA探针同位([32P]pCp)连接标记试剂盒20次小鼠铜蓝蛋白elisa检测试剂盒
3’末端RNA探针同位([γ32P]ATP)标记试剂盒20次小鼠前列腺Felisa检测试剂盒
随机引物DNA探针同位([α32P]dCTP)聚合标记试剂盒20次小鼠D2elisa检测试剂盒
3’末端DNA探针同位([α32P]dATP)聚合标记试剂盒20次小鼠血栓B2elisa检测试剂盒