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单克隆筛选工作原理:
单克隆筛选的重要性:
在单抗开发领域中,细胞株的构建关键环节是要筛选高表达细胞的单克隆,这是FDA等监管部门的要求,也是确保抗体药稳定性的重要依据。在以往的细胞株构建环节中,用户往往采用手动的有限稀释法往96孔板中铺细胞。一般他们会按照0.5或者0.3个细胞每孔,进行细胞铺板。按照泊松分布的规律,会有30%-40%的孔中能进去单细胞,其余的孔含有的细胞数为零个或者两个以上。接下来还要观察孔中的细胞生长情况,通常会采用孔板成像设备对细胞生长状态进行跟踪拍照观察,一般会在铺板完成当天也就是第0天,第1天,第3天......进行拍照存档,为后期确定单克隆提供关键证据。
上述手动有限稀进行单克隆筛选,是操作极为简单且成本极低的方式,但是同时效率也是很低的。为了确保更多的孔中铺进去的是单细胞,所以铺板的初始细胞密度不能过高,所以30%-40%的孔中为单细胞已经是极限了。在这种情况下,还要考虑本身的细胞状态和培养基条件,后每块96孔板能获得的单克隆多也就在10个左右。按照这个比例,如果用户需要收集100个单克隆,至少需要铺10块96孔板。铺板数量上升,随之带来的铺板时间变长之外,成像拍照的时间也大大上升,往往后者带来的影响更大。所以为了节省整个流程的时间,提高每块板子铺板时单细胞比例变得极其重要。
Namocell单细胞分离仪采用微流控技术,能够在1-2min内快速完成96孔板的铺板工作,单细胞效率在90%左右,而且分离过程轻柔,对细胞影响很小,能够确保单细胞顺利生长。具体分离原理和特点参见本站其他文章。