dCTP 100mM
dCTP 100mM
dCTP 100mM
dCTP 100mM
dCTP 100mM

dCTP 100mM

参考价: ¥227.80

具体成交价以合同协议为准
2024-01-12 12:55:06
627
属性:
供货周期:现货;规格:0.25ml;货号:A-Hc2148;应用领域:化工;主要用途:仅供科研研究实验;
>
规格:
0.25ml;
>
产品属性
供货周期
现货
规格
0.25ml
货号
A-Hc2148
应用领域
化工
主要用途
仅供科研研究实验
关闭
dCTP 100mM

参考价: ¥227.80

0.25ml 227.80元 15 盒可售
x
上海抚生实业有限公司

上海抚生实业有限公司

中级会员7
收藏

组合推荐相似产品

产品简介

dCTP 100mM公司正在出售的产品:人胰腺肿瘤细胞(永生化) MFSD11蛋白封闭多肽 拟杆菌属通用PCR检测试剂盒 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)试剂盒 ELISA 淀粉脱分支(DBE)活性比色法检测试剂盒 樊氏盐单胞菌 芳香基硫酯H抗体

详细介绍

商品属性:

产品名称

规格

货号

dCTP 100mM

0.25ml

A-Hc2148

储运温度:-20℃保存

形    态:溶液

纯    度:HPLC检测(C18柱):大于99.5%;经检测确认,用于PCR反应时扩增良好;经检测确认,不含有RNase、DNase。

注意事项: 长期保存可放置-70℃,经常使用可保存于-20℃。

注意:尽量避免多次冻融,切勿暴露在温度波动较大之处,温度波动对产品的稳定性有较大影响。

QQ截图20240110094643.jpg


65.jpg

67.jpg


PCR基本步骤及注意事项?

一、实验原理

PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法,它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而体外PCR反应同样需要类似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列,实现对特定位置的扩增;PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境;反应过程同生物体内一样,DNA双链打开,引物结合模板,延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链,而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链,在退火温度处引物结合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子,进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。

在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增,达到较高水平。因此,应适当调节循环次数,在平台期前结束反应, 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

二、主要的成分

1.模板可以是多种形式,主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物,cDNA等,但不能为RNA。对于不同类型的模板,其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够,质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。

注意cDNA为单链DNA,但仍可做PCR的模板,只不过在第一轮循环时只有一个引物结合,合成另一条链。从第二轮开始,两个引物均与特异位点结合,从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增,原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶,只能特意识别DNA链。

2.对于模版的量来说,一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂,提取的浓度也往往比较大,为防止浓度过大对PCR造成影响,故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单,且提取浓度一般较低,则无需稀释。

PCR实验中应该注意的问题有哪些?

没有ct值

检测结果遇到没有Ct值情况,排查是否有以下问题:

1、循环数不够(一般不超过45循环,不仅背景值提高,定量也不准);

2、PCR程序设置错误,检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,TaqMan法则一般在退火结束时或延伸时采集信号,另外荧光采集是否选中;

3、引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测引物和探针是否降解;

4、模板量可能降解或上样量不足(不超过500ng,根据试剂盒说明书即可), 对未知浓度的样本应从系列稀释样本的最高浓度做起;如果发生模板降解,应考虑样本准备中杂质的引入及反复冻融的情况,建议将模板样本小量分装储备,避免反复冻融;

5、引物探针是否合适(尤其是引物跨越内含子,以确保扩增基因组DNA;上下游引物Tm值超过4℃以上也会影响扩增)。

ct值过晚

在相对定量中, Ct值一般控制在15—25之间比较好,如果在绝对定量中, 对低拷贝数的样品,Ct值会增大, 但是一般不宜超过40循环, 否则定量不准确。

因此,判断Ct值出现过晚是否属于非正常情况, 需要根据具体实验设计和目的进行。

1、扩增效率低。引物之间或者引物和探针的比例不合适, 需要进行优化;引物或探针设计不合理, 需要重新设计;

2、PCR程序不合适, 改用三步法进行反应, 或者优化退火/延伸温度, 可以适当降低退火温度; 退火/延伸时间短(可以在推荐的时间条件下延长10s);

3、MgCl2浓度不合适,增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足;

4、PCR产物太长。PCR产物设计超过500bp;

5、模板中存在抑制物。用高纯度模板进行PCR检测或将模板进行稀释。

公司正在出售的产品:

大森林埃博拉病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

单纯疱疹病毒型抗体ELISA试剂盒 HSVⅠAb免费代测试剂

化脓放线菌染料法荧光定量PCR试剂盒

百部染料法PCR鉴定试剂盒

层粘连蛋白β2ELISA试剂盒 LAMβ2免费代测试剂

即鸡包涵体肝炎病毒病毒PCR检测试剂盒供应

猪布氏杆菌PCR检测试剂盒

Q热科克斯体1ELISA试剂盒

米氏旋毛虫PCR检测试剂盒

肠道病毒PCR检测试剂盒

沉默调节蛋白5ELISA试剂盒

米曲霉通用型探针法荧光定量PCR试剂盒

瘰疬分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

单酰甘油-O-酰基转移2ELISA试剂盒

唾液弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

禽肾炎病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

蛋白二硫化物异构A5ELISA试剂盒

转基因植物PRSV基因PCR检测试剂盒

禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)核检测试剂盒

蛋白体亚基α1ELISA试剂盒

诺如病毒G3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

螺旋体通用探针法荧光定量PCR试剂盒

电子传递黄蛋白脱氢ELISA试剂盒

轮状病毒A群探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

轮状病毒群PCR检测试剂盒

端粒延长分子2ELISA试剂盒

脑膜炎奈瑟菌群PCR检测试剂盒说明书

病毒N9亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法)

耳锚蛋白ELISA试剂盒

蒙得维的沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒

库皮科斯病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

人肝细胞核因子1β(HNF-1B)试剂盒ELISA

牛血吸虫PCR检测试剂盒

普氏立克次氏体PCR检测试剂盒说明书

人铜蓝蛋白(CP/CER)elisa试剂盒

乌梅染料法PCR鉴定试剂盒

鸭乙型肝炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

人电压门控钾通道抗体(VGKC-ab)ELISA检测试剂盒

猪圆环病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒

溶酪巨球菌PCR检测试剂盒

SPARC相关模块化钙结合蛋白2(SMOC2)检测试剂盒elisa

dCTP 100mM鹦鹉热衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒

猪内源性逆转录病毒前病毒PCR检测试剂盒

人表皮角蛋白(EK) ELISA试剂盒

驽巴贝斯虫PCR检测试剂盒

 


上一篇:大鼠脑动脉血管内皮细胞*培养基运输和保存 下一篇:人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)ELISA试剂盒实验规则
热线电话 在线询价
提示

请选择您要拨打的电话:

当前客户在线交流已关闭
请电话联系他 :