公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

产品介绍：TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。

无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够做RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外转录、RNA酶保护分析和分子克隆。

TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA通过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙锭染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5kb (28S)和~2kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA，5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A 260 /A 280 比值≥1.8。

产品储存：TRzol在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2-8℃的环境下。

PCR 反应需要使用哪些试剂和设备？

试剂:
模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
设备：
PCR仪：用于控制反应温度，保证PCR反应时不同温度环节的严格控制；电泳槽：用于分离PCR扩增产物；核酸提取仪：从组织样本中全自动提取核酸。  这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是，只有在有序齐全的基础上，才能进行PCR反应并得出准确结果。

PCR相关基础实验：

PCR反应基本步骤一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：

一、变性：

利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。

二、退火或称接合,复性：

在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。

三、延伸：

DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR反应条件优化：

1、变性温度和时间：

保证模板DNA解链是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。

2、复性温度和时间:

PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。

3、延伸温度和时间:

一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。

4、循环数:

其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。

公司正在出售的产品：

TRzol（总 RNA 提取试剂）( 红 )	Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因核酸检测试剂盒	辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒（比色法）
TRzol（总 RNA 提取试剂）( 无色 )	季节性流感病毒 H3N2 亚型 HA 基因核酸检测试剂盒	NAD激酶（NADK）测试盒（比色法）
TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）	H7N9 亚型病毒 HA 基因核酸检测试剂盒	乳酸脱氢酶（LDH）测试盒（比色法）
RNApure 超纯总 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)	H7N9 亚型病毒 NA 基因核酸检测试剂盒	NAD苹果酸脱氢酶（NADMDH）测试盒（比色法）
EASYspin 全血 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I )	乙型流感病毒核酸检测试剂盒	NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）测试盒（比色法）
EASYspin 组织 / 细胞 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)	乙型流感病毒 Yamagata 系核酸检测试剂盒	线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶测试盒（比色法）
EASYspin 植物 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I)	乙型流感病毒 Victoria 系核酸检测试剂盒	NADH氧化酶（NOX）测试盒（比色法）
PLANTaid 植物 RNA 助提剂	病毒 H7N9 变异株( HPAI-H7)核酸检测试剂盒	柠檬酸合酶(CS）测试盒（比色法）
病毒基因组 DNA/RNA 快速提取试剂盒	季节性流感病毒 H1N1 亚型 HA 基因核酸检测试剂盒	乙醇含量测试盒（比色法）
RNAclean RNA 清洁纯化试剂盒	丙型流感病毒核酸检测试剂盒	乙醇脱氢酶（ADH）测试盒（比色法）
RNAfixer 无液氮 RNA 样品储存液	欧亚类禽猪流感病毒( EA-H1N1 )核酸检测试剂盒	甲醛脱氢酶（FDH）测试盒（比色法）
RNAsafe 高效 RNase 灭活剂	甲型流感病毒 / 乙型流感病毒核酸检测试剂盒	乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒（比色法）
RNAlong RNA 长期保存液	H7N9 亚型病毒核酸检测试剂盒 / 含内标	辅酶ⅡNADP(H)含量测试盒（比色法）
RNase Away 即用型强力 RNase 灭活剂	季节性流感病毒 H3N2 亚型核酸检测试剂盒	NADP磷酸酶（NADPase）测试盒（比色法）