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EGY48酵母感受态细胞基因型:
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
EGY48酵母感受态细胞简要说明:
EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;Transformation marker为: his3, trp1, ura3,报告基因为:LEU2;报告基因UAS(上游激活序列)来源于LexA op(x6),只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。
EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。
质粒pLexA的筛选标志为HIS3,用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;
质粒pB42AD的筛选标志为TRP1,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白;
报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3,报告基因为LacZ,报告基因UAS来源于LexA op(x8) ,只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。 High5TM系列Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,经PGBKT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA 。
EGY48酵母感受态细胞操作说明:
1. 取100 μl冰上融化的 EGY48感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc 500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心40s弃上清,ddH2O 400ul重悬,离心30s弃上清。
4.ddH2O 50ul重悬,涂板,29℃培养48-96h。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面,实力雄厚,拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类,共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面,拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类,极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。