Rosetta-gami B(DE3)

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell

产品编码：                                                                    保存条件： -80℃ 产品规格:


 

Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞基因型：

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)

Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞简要说明：

Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了 BL21，Tuner，Origami 和 Rosetta 四种菌株的优点： --

＊ lacY1 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其 Tuner 菌株的优点——IPTG 以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个 细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。--
＊ pRARE 赋予其 Rosetta 菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA) 对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平。--
* gor522::Tn10 trxB 赋予其 Origami 菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷 胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的 含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。 --
＊ 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区 (DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶)适合 T7 启动子诱导的蛋白表达。

＊ --Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四环素抗性，由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒 检测转化效率高达 108 cfu/μg DNA。

Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞操作说明:

1. Rosetta-gamiB(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA 并用手 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。--
2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。--

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB)，混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分钟。--

4. 5000rpm 离心一分钟收菌，，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含 34 µg/ml 氯霉素及所选质粒筛选 抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。--
5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。--