BL21(DE3)感受态细胞基因型：

F^- ompT hsdSB(r_B^- m_B^- ) gal dcm(DE3)

BL21(DE3)感受态细胞简要说明：

 BL21（DE3）感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
 BL21（DE3） 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达10⁷cfu/μg。
 

BL21(DE3)感受态细胞操作说明：

1.  取100μl冰上融化的 BL21（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激90秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

BL21(DE3)感受态细胞注意事项：

1.   感受态细胞在冰上融化。
2.  混入质粒时应轻柔操作。
3.  转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.  诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

 

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