分枝杆菌属通用PCR试剂盒

产品内容：

注意：1、引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入 110uL 的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

2、为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的 DNA 片段作为阳性对照。

储存条件及有效期：

低温运输，-20℃保存，保存期限为 24 个月。

自备试剂：

样品 DNA

1.如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用试剂盒提供的PCR 阳性对照（1×10E4 拷贝/μL，本试剂盒提供）10μL 加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始  样品体积一样）。可以直接用水作为制备的阴性对照。

2.用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA-提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸-提取试剂盒。

应用范围：

常规PCR；T/A克隆；菌落PCR鉴定。

PCR过程：

1.变性

当反应混合物加热0.5至2分钟至94°C时，发生变性。

由于 DNA 两条链之间的氢键断裂，形成单链DNA。

单条 DNA链现在充当合成其他 DNA链的模板。

2.退火

持续约20至40秒，反应温度降至54至60℃。

在这种情况下，引物附着在模板 DNA的互补序列上。

引物序列是20-30个碱基长的单链 DNA或RNA片段。

它们充当 DNA生产的前体。

有两个引物-正向引物和反向引物一一两条分离的链以相反的方向延伸。

3.延伸

在此阶段温度升高至72至80摄氏度之间。

Taq聚合酶将碱基固定到引物的3'未端。结果,DNA从5'延伸至3'。

Taq聚合酶可以承受极-高的温度。结果产生双链DNA分子。

为了在短时间内获得多个感兴趣的 DNA序列，这三个过程需要进行20-40次。

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