真菌通用PCR试剂盒

产品内容：

产品优势：

1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.产品经过精心优化，分析灵敏度高，可以达到 100 拷贝/反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据真菌通用 DNA 高度保守区设计，不会跟除此之外的其它 DNA 发生交叉反应。

5.本产品足够 50 次 20 L 体系的 PCR 反应。

6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7.本产品只能用于科研。

储存条件及有效期：

低温运输，-20℃保存，保存期限为 24 个月。

自备试剂：

样品 DNA

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10 L 真菌通用 PCR 阳性对照（1×10E7 拷贝/L，本试剂盒提供）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于  所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。

2.用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数 DNA-提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的核酸-提取试剂盒或免提取核酸释放剂。

应用范围：

常规PCR；T/A克隆；菌落PCR鉴定。

PCR过程：

1.变性

当反应混合物加热0.5至2分钟至94°C时，发生变性。

由于 DNA 两条链之间的氢键断裂，形成单链DNA。

单条 DNA链现在充当合成其他 DNA链的模板。

2.退火

持续约20至40秒，反应温度降至54至60℃。

在这种情况下，引物附着在模板 DNA的互补序列上。

引物序列是20-30个碱基长的单链 DNA或RNA片段。

它们充当 DNA生产的前体。

有两个引物-正向引物和反向引物一一两条分离的链以相反的方向延伸。

3.延伸

在此阶段温度升高至72至80摄氏度之间。

Taq聚合酶将碱基固定到引物的3'未端。结果,DNA从5'延伸至3'。

Taq聚合酶可以承受极-高的温度。结果产生双链DNA分子。

为了在短时间内获得多个感兴趣的 DNA序列，这三个过程需要进行20-40次。

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