本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人β内酰胺酶(β-lactamase)的含量。

l  有效期：6个月

l  保存条件：2-8℃

人β内酰胺酶(β-lactamase)ELISA试剂盒实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人β内酰胺酶(β-lactamase)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人β内酰胺酶(β-lactamase)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

人β内酰胺酶(β-lactamase)ELISA试剂盒样本处理及要求

1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

1.     酶标仪（450nm）

2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒温箱

4.     蒸馏水或去离子水

人ELISA试剂盒使用说明书

科研ELISA试剂盒标本的采纳和保存

可用作科研ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同即是血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝结、xue块缩短后即可获得。除特殊情况外，在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等使用。血清标本可按惯例方法收集，应留心防止溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本或许会增加非特异性显色。

血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中或许含有内源性HRP，也会发生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其间的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少数分装冰存。保存血清自收集时就应留心无菌操纵，也可加进适当防腐剂。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

1.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

2.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

注释：本公司所有产品仅用于科研，不得用于临床。