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血液RNA DNA小量提取试剂盒提取系列
试剂盒组成包括血液RNA&DNA保护液(Buffer BR1, Cat#RP601),方便了样品的分次收集、运输和保存。
血液样品与Buffer BR1按照1:2.5的比例混合后室温放置2小时,样品中的DNA和RNA被固化为容易被离心沉淀的粉末状凝集物。
DNA吸附柱-RD选择性吸附DNA,保留RNA于滤液中。滤液中加入乙醇调整结合条件后,RNA吸附柱-A有效吸附大分子RNA (包括mRNA和rRNA,不包括tRNA和降解为5S的小RNA)。
DNA吸附柱-RD和RNA吸附柱-A分别洗涤后,使用去离子水或低盐溶液分别洗脱DNA和RNA,可直接用于后续实验。
本试剂盒适合从≤1ml新鲜的人或哺乳动物全血,≤3ml冻存的人或哺乳动物全血中分别提取DNA和RNA,适合处理的血液为EDTA-K2抗凝血,不适合处理肝素或者柠檬酸抗凝的血液。
RNA产量与应用: 3-8 μg RNA/ ml新鲜血液,1-2 μg RNA/ ml冻存血液;小洗脱体积15 μl。已去除大部分tRNA和降解为5S的小RNA,可直接用于5`RACE和3`RACE。
DNA产量与应用:5-10 μg DNA/ ml血液;小洗脱体积50 μl。纯度低于血液基因组DNA提取系列试剂盒,可用于酶切和常规PCR。
本试剂盒也适合从动物粪便和软体动物肠道内容物中提取病毒RNA和DNA。
生理盐水分散样品,离心上清中含病毒RNA和DNA。离心上清与Buffer BR1按照1:2.5的比例混合后室温放置2小时,样品中的DNA和RNA被固化为容易被离心沉淀的粉末状凝集物,此过程可去除绝大部分PCR抑制成分。后续操作与处理血液样品相同。
从0.4ml新鲜全血中提取RNA
洗脱体积25 μl,电泳体积2 μl,1×TAE,2% agarose,6.7 V/cm 15 min
从新鲜血液中获得的RNA无明显的基因组DNA和5S RNA。
在非变性琼脂糖凝胶中,28S RNA、18S RNA和5S RNA分别与2000 bp DNA、750 bp和100 bp DNA迁移率相似。
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