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ScienCell胎牛血清(0500)
货号:0500
规格:500ml
千舍生物开工大吉,干细胞专用,特级胎牛血清*......
1. 如何选用特殊细胞系培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2. 何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS 乃错误的使用字眼, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2?或根本没有影响?
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时, 则应使用5 % CO2 培养细胞。
7.Hank's 蛋白酶(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank's 蛋白酶(HBS)和Earle's蛋白酶(EBS)有什么本质的功能差别?
HBS和 EBS 的主要差别在于氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中,溶液会变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagles液,。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks液就可以了。
8. 细胞之接种密度为何?
依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
9. 悬浮性细胞应如何继代处理?
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可,若培养液太多时, 可将培养角瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤即可。
10.冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后, 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。
11. 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
12. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于–20 °C,避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低,并可减少污染之机会。
13.欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?
欲回收动物细胞, 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10 分钟, 过高之转速, 将造成细胞死亡。
14. 细胞冷冻培养基之成份为何?
动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO 直接加入细胞液中, 必须使用前先行配制完成。
15.DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何?
冷冻保存使用之DMSO 等级, 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650),其本身即为无菌状况, 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中, 保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质, 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO, 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。
16.冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中,惟存活率稍微 降低一些。
17. 细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?
冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial, 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。
18.培养基中是否须添加抗生素?
除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何抗生素。
19.应如何避免细胞污染?
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染好方法。
20.如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?
原则上:直接灭菌后丢弃之。
当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2.分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,霉素b推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3.每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4.确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。
5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6.重复步骤4。
7.在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。
21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞,是否能以肉眼观察出异状?
不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。
22.支原体污染会对细胞培养有何影响?
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数, 代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。
23. 侦测出细胞株有支原体污染时, 该如何处理?
直接灭菌后丢弃,以避免污染其它细胞株。
24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁?
定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
25.为何培养基保存于4 °C 冰箱中, 颜色会偏暗红色, 且pH值会越来越偏碱性?
培养基保存于4 °C 冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果,将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时,可以通入无菌过滤之CO2, 以调整pH 值。
26. 各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?
不同厂牌的dish 或flask, 其所coating 的polymer 不同, 制造程序亦不同, 虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。
27. 购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?
研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少, 大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤, 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心, 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳, 常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。
29. 收到之冷冻管瓶身破裂,瓶盖有裂纹,或瓶盖脱落之原因?
冷冻管瓶盖裂纹,或瓶身破裂,可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当,造成冷冻管裂损,建议使用小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱,乃因热胀冷缩之物理现象,冷冻管有可能因此而造成细胞污染,故冷冻管于放入和取出液氮桶时,均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
30.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。
31.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎*降解。
32.什么培养基中可以省去加酚红?
酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
33.如何用台盼兰计数活细胞?
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升,在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色细胞是死细胞。
34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。
35.二价离子抑制蛋白酶活性吗?使用蛋白酶时加入EDTA的目的是什么?
二价离子的确抑制蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制蛋白酶的活性。建议蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。
06、培养基到底要不要加抗生素?
除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。如果是没有进行过细胞培养的新手,对无菌技术没有信心的,或者提取的原代细胞,怕污染的,可以适量添加抗生素。抗生素本身也是有毒性的,有些抗生素的药效浓度水平与毒效浓度水平非常接近,对细胞多少有伤害。
07、培养箱二氧化碳使用比例如何判定?
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5CO2培养细胞。
08、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。
09、培养基里的粉红色是什么?
酚红一般作为培养基中pH值的指标:当培养基呈中性时为红色,呈酸性时为黄色,碱性时为紫色。另外,酚红可以模拟类固醇激素(特别是雌激素)的作用。如果要避免类固醇反应,可以在无酚红的培养基里进行培养。
10、胰酶里EDTA的作用?
二价的离子会抑制胰酶活性,所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg这样的二价离子。胰酶也要注意不要反复冻融。
11、如何避免细胞培养过程中的污染?
主要还是考虑无菌环境,尽量做好操作台的灭菌,别把培养基滴落在生物安全柜的入风口,别在培养箱里把培养基打翻。这两个地方霉菌一旦滋生,那你就只能等着用甲醛熏蒸了。
紫外无法杀灭霉菌,酒精也不行,只能用甲醛熏蒸,但是一定要注意安全。复苏的时候,水浴锅也需要进行灭菌处理。一旦出现污染,不要急,能救的就用抗生素救一下,但是一般情况下,选择扔掉。避免交叉感染,要不只能整个实验室消毒了。
ScienCell胎牛血清(0500)
人 SV40 转染成骨细胞 HFOB1.19
人胃癌细胞 HGC-27
人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2
人肾上皮细胞 HKb-20
人早幼粒白血病细胞 HL 60(hl-60)
人肝细胞 HL-7702[L-02]
人小胶质细胞 HMC3
人高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM
人骨肉瘤细胞 HOS
人胰腺癌细胞 HPAC
人胎盘细胞(有限细胞系) Hs 815.Pl
人乳腺癌细胞 HS578T
人脑胶质瘤细胞 HS683
人真皮成纤维细胞(原代细胞永生化) HSF(SV40)
人纤维肉瘤细胞 HT-1080
人膀胱癌细胞 HT-1376
人结肠癌细胞 HT-29 (HT29)
人眼小梁网细胞 HTMC
人胰腺导管细胞 HPNE
人肝母细胞瘤细胞 HUH-6
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人肝癌细胞 huh-7.5.1
人T淋巴细胞白血病细胞 HUT-78
人十二脂肠腺癌 HUTU-80
人脐静脉内皮细胞(原代细胞永生化) HUVEC
人脐静脉内皮细胞 HUV-EC-C
人脐静脉内皮细胞永生化+RFP HUVEC+RFP
人脐静脉内皮细胞永生化+GFP HUVEC+GFP
人诱导多能干细胞 iPS
人子宫内膜癌细胞 Ishikawa
人正常卵巢上皮细胞系 IOSE-80(IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN)
人胚肺成纤维细胞 IMR-90
人急性T细胞白血病细胞 J.gamma1
人膀胱移行细胞癌 J82
人胎盘绒毛癌细胞 JAR
人胰腺癌细胞 JF-305
人绒毛膜癌细胞 JEG-3
人T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat(clone E6-1)
人慢性骨髓性白血病细胞系 K562
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人口腔表皮癌细胞 KB
人急性髓性白血病细胞 KG-1a
人卵巢颗粒细胞瘤细胞 KGN
人脑胶质细胞瘤细胞 KNS-89
人外周血嗜碱性白血病细胞 KU812
人食道癌细胞 kyse30
人肝癌细胞 Li-7
人胶质瘤细胞 LN229
人前列腺癌细胞 LNCaP clone FGC
人结直肠癌细胞 lovo
人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株 LOVO/5FU
人结直肠癌细胞荧光素酶标记 LOVO+LUC
人结直肠腺癌细胞 LS174T
人结直肠癌细胞 LS180
人结直肠癌细胞 LS513
人肝星形细胞 LX-2
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人乳腺癌细胞荧光素酶标记 MCF-7+luc
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人乳腺癌细胞 MDA-MB-361
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人乳腺癌细胞 MDA-MB-436
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人乳腺癌细胞 MDA-MB-468
人子宫颈表皮癌细胞 ME-180
人膜间皮细胞 MET-5A
人骨肉瘤细胞 MG63
人胃癌细胞 MGC-803
人高转移性肝癌细胞 MHCC-97H
人高转移性肝癌细胞荧光素酶标记 MHCC-97H+luc
人高转移性肝癌细胞 MHCC-97L
人胰腺癌细胞 MIA-PACA-2
人胃癌细胞 MKN-45
人多发性骨髓瘤细胞 MM.1R
人多发性骨髓瘤细胞 MM.1S
人急性淋巴母细胞白血病细胞 MOLT-4
人胚肺成纤维细胞 MRC-5(有限细胞系)
人急性淋巴母细胞白血病细胞 MT-4