ScienCell胎牛血清

产品名称：特级胎牛血清

货号：0500

规格：500ml

WINSERA® Fetal Bovine Serum 胎牛血清目录如下：

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如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用蛋白酶消化吗？

我们推荐使用脱落细胞的方法，此技术破坏性最小，生活力最高。通过使用巴斯德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰消化细胞。

38.胰消化一个T25瓶的sf9细胞：

1. 去除培养基。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆盖细胞表面）。

4. 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。

5. 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰的活性。）

6. 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。

7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？

为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。

40.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？

通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候计数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。

41.贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，在放置几天后颜色变紫?

这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。

42. 细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？

如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。

43. 无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？

当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。

44. 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

45.培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？

大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。

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ScienCell胎牛血清保存血清最好方法是什么？

   我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的无菌容器内，再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。

② 如何解冻血清才不会使产品质量受损？

   我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

③ 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？

   血清在解冻过程（包括没有*解冻）或储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如凝集素、纤维蛋白原和玻连蛋白等）可能会聚集成团，形成絮状沉淀或外观混浊；在运输过程中，由于时间较长，所以往往有少许解冻，因此也可能稍有沉淀，但这些都不影响血清性能。

   若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

④ 何谓热灭活？

   一般是以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

⑤ 有必要作热灭活吗？

   实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清，沉淀物的形成，会显著增多，这些沉淀物在导致显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者认为血清遭受污染，而把血清放进37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

   因此我们建议您，若非必须，您可以不做热灭活处理血清。这样，不仅节省您宝贵时间，更确保血清的质量。只在做免疫学研究或培养干细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时才推荐做热灭活。我公司也有已经热灭活的血清可供选择。

⑥ 如何减少沉淀物的产生？

   我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作：

   ● 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-20℃至4℃至室温），若血清解冻时，改变的温度太大（如-20℃至37℃），实验显示非常容易产生沉淀物。

   ● 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

   ● 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

   ● 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，则毋须做此步骤。

若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。