流式细胞术是一种功能强大的方法，被广泛用于细胞的高通量定量和定性分析。然而，由于细胞外囊泡（EVs）（主要是外泌体）体积小（外泌体：~80-200 nm，微囊泡：~200-1,000 nm）、多分散性和低折射率等原因，流式细胞术在细胞外囊泡（EVs）（主要是外泌体）的直接应用受到了一些挑战的阻碍。目前最好、使用的外泌体无珠流式细胞术方案是使用超速离心法（UC）结合蔗糖梯度漂浮法分离外泌体，用亲油性染料 PKH67 和抗体标记外泌体，并使用优化版商用细胞仪进行分析。然而，这种方法需要经验丰富的流式细胞仪操作员能够手动调整硬件和校准细胞仪。在这里，我们提供了一种新颖、快速的方法，通过使用专为小颗粒设计的流式细胞仪，对从细胞培养基以及更复杂的人体样本（卵巢癌患者腹水）中分离出来的外泌体和微囊泡进行定量和表征，这种方法适用于多用户实验室，在数据采集前无需调整即可使用。