Lemo21(DE3)化转表达感受态

产品简介 DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株， mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真 核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突变有利于插 入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛 选，rpsL 赋予其链霉素抗性。 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建，经特殊 工艺制作，pUC18 质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

Lemo21(DE3)化转表达感受

存储条件 -80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 无外源质粒 DNA 残留； 电转法转化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。 使用方法 1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟， 使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯 盖，冰中静置 5 分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的 DH10B 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接 产物)并用手拨.打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC18；

Lemo21(DE3)化转表达感受态

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重 悬，DNA 浓度不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。 3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按 所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。 5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心 管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。