1. 产品包装

2. 产品概述

Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒， 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的 formazan (参考图 1) 。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan  量)  和细胞数目呈线性关系(图 2) 。

WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和MTT 或其它MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点：①MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的， 需要有特定的溶剂来溶解， 而WST-8 和 XTT、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤；② WST-8 产生的 formazan 比XTT 和MTS 产生的 formazan 更易溶解；③WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠；④ WST-8 和MTT、XTT 等相比线性范围更宽， 灵敏度更高，并且更加稳定。 WST-8 对细

胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后， 可以在不同时间反复 用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。

3. 操作说明

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

1. 制作标准曲线

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
2. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细 胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；
3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。

2. 细胞活性检测

1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ 孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
2. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8  溶液 (注意不要产生气泡) ；
3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

3. 细胞增殖-毒性检测

1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ 孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
2. 向培养板加入不同浓度的待测药物；
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；
4. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8  溶液 (注意不要产生气泡)；
5. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

4. 计算公式

细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，