C58C1：                                                                    100μl/支
pCAMBI2301（control vector，10ng/μl )                      10μl
保存条件(保质期)：                                         -80℃（12个月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R,rif^R ) pRiA4b (agropine type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1发根农杆菌菌株含有pRiA4b农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有链霉素，利福平抗性。本公司生产的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

常规操作方法

1.取-80℃保存的C58C1发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.  每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高一次使用前好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3 天

● 农杆菌相关抗生素配方：

常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● TY配方（1L）：

Tryptone              5g

Yeast extract          3g     

补水到1L体积，*溶解后，121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4.  C58C1具有链霉素、利福平抗性，不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。