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经销商厂商性质
上海市所在地
Ar.A4 Electro： 50μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）
基因型
Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染
大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广
泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。唯地生物开发的Ar.A4发根农杆菌
电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；
经pK7WGF2-ZH质粒（size:40 kb）检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充
分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟
充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，用
试剂盒抽提，双蒸水溶解；转化效率较高，一次使用前好做预实验确定所加质粒的量），用手打管底混匀
，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用
电转仪推荐的protocol操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动电击，
电击完成快速插入冰中，加入1 ml无抗生素的TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放
于28℃培养箱培养2-3天
● 农杆菌相关抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧苄青霉素 (carb) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素 (kan) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
链霉素 (strep) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平 (rif) | DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
庆大霉素 (gent) | 双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
氯霉素（cam） | 无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌 | 34 mg/ml | 34 ug/ml |
常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)
农杆菌菌株 | 羧苄青霉素(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(cam) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
● TY配方（1L）：
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
补水到1L体积，*溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率
急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的
菌落，应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。
4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
