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血液基因组提取试剂盒(高盐法)
产品货号:28102
产品规格:50 次/100 次/200 次
产品简介:
血液基因组提取试剂盒(高盐法)采用高盐法提取血液中的基因组 DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有 机化合物。提 取的基因组 DNA 的片段大,纯度高,质量稳定可靠。 使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。
包装清单:
产品名称 | 50次包装 | 100次包装 | 200次包装 | 储存条件 |
Buffer A | 30ml | 60ml | 120ml | 室温 |
Buffer B | 25ml | 50ml | 100ml | 室温 |
SDS Solution | 3ml | 5ml | 10ml | 室温 |
High Salt Buffer | 20ml | 40ml | 80ml | 室温 |
Washing Buffer | 10ml | 20ml | 40ml | 室温 |
Buffer EB | 5ml | 10ml | 20ml | 室温 |
Proteinase K溶液 | 0.3ml | 0.5ml | 1ml | -20℃ |
自备试剂:
使用前 Washing Buffer 试剂 50 次加入 40ml 无水乙醇/100 次加入 80ml 无水乙醇/200 次加入 160ml 无水乙醇
操作步骤:
以下步骤以提取 0.2ml 血液中基因组为例,具体实验可根据血液量等比例减少。
1. 于离心管中加入 0.2ml Buffer A 和 0.2ml 预冷的超纯水。上下颠倒 6-8 次,冰上孵育 2-3min;
2. 3500rpm 离心 15min,弃上清;
3. 于沉淀中加入 0.2ml 的 Buffer A 及 0.6ml 的超纯水,涡旋 30s,3500rpm 离心 15min,弃上清;
4. 重复步骤 2-3;
5. 于沉淀中加入 0.5ml Buffer B,50μl SDS Solution 溶液,剧烈涡旋 30-60s 至沉淀重悬,加入 5μLProteinase K 溶液;
6. 充分颠倒混匀,56℃放置 0.5-2h,其间颠倒混匀数次,溶液应变清亮(如溶液未*变清亮,请延长裂解时 间至溶液清亮为止)。 注意:加入缓冲液 Buffer B 时可能会产生白色沉淀,一般 37℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变 清亮,说明细胞裂解不*,可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯,需等比例补加 Buffer B 及 Proteinase K。
7. 将离心管冰上孵育 2-3min 至冷却,加入 High Salt Buffer0.4ml,剧烈涡旋 15s;
8. 12000rpm 离心 5min,将上清收集于一新的离心管中,加入等体积预冷的异丙醇,上下颠倒 5-6 次以沉淀析 出 DNA;
9. 12000rpm 离心 10min,吸弃上清,加入 1ml Washing Buffer ,轻轻吹起沉淀后 12000rpm 离心 10min,吸弃 上清。
10. 将离心管室温干燥,加入 20-50μl Buffer EB 重新溶解沉淀 DNA。-20℃保存 DNA。
注意事项:
1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。
2. 若 Buffer B 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
3. 所有离心步骤均可室温下进行。