酵母质粒提取试剂盒   核酸提取纯化

产品货号：26220

产品规格：50T/100T

产品简介：

       酵母质粒提取试剂盒   核酸提取纯化采用酶法破碎酵母细胞壁和碱裂解法裂解酵母细胞来提取酵母质粒 DNA。所采用的酵母破壁酶能有 效地破坏酵母细胞壁，提高酵母质粒 DNA 的产量。吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附 DNA，可 大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。使用酵母质粒提取试剂盒提取的酵母质粒 DNA 可适用于各种常规的分子 生物学实验，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。本试剂盒无需使用酚等有毒试剂，操作安全。

产品组成：

注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。YP1 在使用前先加入 RNaseA （将 试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入），混匀，置于 2-8 ℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在 室温下离心。

操作步骤：

1. 取 1-5ml 酵母培养物（不超过 5×10 7 cells），12000rpm 离心 1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多 次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2. 酵母细胞壁的破除： A、酶法：向酵母菌体中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分悬浮菌体，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul 巯基还原剂， 充分混匀，30℃处理 1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。12000rpm 离心 1min，弃上清，收集沉淀。向沉淀 中加入 250ulYP1（请先检查是否已加入 RNaseA），充分悬浮沉淀。注意：如果菌块未*混匀，会影响裂 解导致质粒提取量和纯度偏低。 B、玻璃珠法：向酵母菌体中加入 250ul YP1（请先检查是否已加入 RNaseA），充分悬浮沉淀。加入 150-200ul 酸洗玻璃珠（自备），漩涡振荡 10min。简短离心使玻璃珠沉降到离心管底，吸取上清（如上清有所损失， 请用 YP1 补足至 250ul）于另一干净离心管中。

3. 向离心管中加入 250ul YP2，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细 菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破坏。