柱式组织基因组提取试剂盒

产品货号：28105

产品规格：100 次/200 次

产品简介：

   柱式组织基因组提取试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物、人组织中提取高纯度总 DNA。本品可纯化获得分子量大为 50 kb 的 DNA的 片段，纯化过程不需使用苯酚等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。试剂盒采用优化的缓冲体系使 裂解液中的 DNA 高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，PCR 和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤 被有效去除，后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度 DNA。纯化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、 Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

自备试剂：无水乙醇

包装清单： 

操作步骤：

1.如果提取材料为动物组织，取 25 mg（脾组织用量应少于 10 mg）；如果材料为鼠尾，取一段长度为 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或两段长度为 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。

a.样本进行液氮研磨或切成小块后置于 1.5 ml 离心管中，加入 180 μl Buffer GTL，将不同样品做好标记。

b.若使用匀浆器处理样本，匀浆前向样本中加入不超过 80 μl Buffer GTL，匀浆后加入 100 μl Buffer GTL。

注意：

1）确保各组织的量不要超出*范围。

2）组织样本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用匀浆器匀浆处理，可以增加 裂解效率。

2.加入 20 μl Proteinase K，涡旋震荡使样品*混匀。56℃水浴，直至组织*裂解，孵育过程中可每 隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。

注意：

1）不同组织消化时间不同，通常 1-3 小时即可完成，鼠尾需要消化 6-8 小时，必要时过夜消化，不会影响 后续操作。

2）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，延长 56℃孵育时间或再加入 20 μl Proteinase K 消化。

3）如需去除 RNA，可在上述步骤完成后，加入 4μl 的浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 溶液，涡旋 15 秒，室 温放置 5-10 分钟。 3.加入 200 μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，70℃水浴 10 分钟。短暂离心后加入 200 μl 无水乙醇， 涡旋震荡充分混匀。

注意：

1）加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。

2）加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。一些组织（如脾，肺）在加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时*进行剧烈震荡或涡旋处理。

4.柱平衡：向已装入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS， 12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

5.将步骤 3 所得溶液短暂离心，全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完 溶液，可分多次转入。12000 rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6.向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm 离心 1 分钟， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分 钟再离心。

7.重复步骤 6。

8.12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液。

注意：

这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

9.将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加 50μl Buffer EB，室温 放置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

1）洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围）。

2）为了提高基因组提取量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置 2 分钟，12000 rpm 离心 1 分钟。

3）洗脱体积不应小于 30μl，体积过少会影响回收效率。

注意事项 ：

1.*使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇（Buffer PW 100 次包装 18ml，使 用前加入 72ml 无水乙醇；Buffer PW 200 次包装 18ml，使用前加入 144ml 无水乙醇）；

2.所有离心步骤均可室温下进行。