淋巴细胞培养基（染色体病）

产品名称：

通用名称：淋巴细胞培养基（染色体病）

英文名称：Lymphocyte Medium

包装规格：4ml/瓶，56 瓶/盒

预期用途：

淋巴细胞培养基为细胞标本前处理试剂，用于淋巴细胞增殖培养，培养后的淋巴细胞用于体外诊断，该产品不用于 治疗性用途。 主要组成成分： RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。

使用方法：

1. 采血与接种

  采取外周血 1-2ml，在无菌条件下立即种血 0.3ml（7 号针头约 20 滴）至淋巴细胞培养基内，充分摇匀。

2. 培养

  将培养瓶放入 37℃恒温箱中培养 68-72 小时，培养期间注意观察培养基有无凝血、溶血或长菌的现象 （可培养 24 小时后将培养基轻摇一次，以便细胞可以获得充分的营养）。

3. 制片

3.1 秋水仙素处理：

  在终止培养前，加入浓度为 20μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴（7#针头竖滴）后，继续培养 2-3 小时；

3.2 收细胞：

  将培养完成的培养基倒入对应的离心管内，以 1500rpm 离心 7-10 分钟，弃去上清液；

3.3 低渗：

  向离心管内加入 37℃预温的低渗液（0.075mol/L 氯化/钾溶液）8ml，用吸管反复吹匀 10 次，置 37℃水浴箱 中水浴 25-35 分钟；

3.4 预固定：

  向低渗的细胞悬液内缓慢加入新配制的固定液（甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合）1-1.5ml，轻轻混匀后置室温 静置 20 分钟后，1500rpm 离心 7-10 分钟，弃去上清液；

3.5 固定：

  沿管壁缓慢加入现配的预温至 37℃的新配固定液约 8ml 轻轻混匀，然后 2000rpm 离心 10 分钟。加入固定液 再次固定，弃上清，重复固定 1-2 次。用固定液将沉淀调成细胞悬液（不宜太浓，一般加固定液至 0.5ml）在冰 片上滴片，每张片上滴 2 滴。

3.6 烤片：

  立即放入 75℃烤箱中烤片 3 小时。

4. 显带

  先将玻片放在预温至 37℃的 0.25%胰酶溶液中（pH=7.2-7.4）消化 1 分左右，每次作用时间并不*相同。 可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间，再放在预温至 37℃的 0.85% NACl 溶液中漂洗两次，在预 温至 37℃的吉姆萨染液中染色 10 分钟，自来水冲洗干净，用吹风机吹干，即可阅片。

注意事项：

1. 采集的外周血若立即接种则无需加肝素抗凝，如需保存标本，应加肝素抗凝；

2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存，保存期不亦超过一周。

储存条件及有效期：

  4-8℃保存，有效期 1 个月，-5℃以下保存，有效期 12 个月，可稳定至保质期末。