红细胞裂解液（10×）

产品货号：T16121

产品规格：100ml/500ml

产品简介：

  在生物科研领域，经常需要去除红细胞。去除红细胞的方法有多种，如ACK LysisBuffer、Tris-氯化铵红细胞 裂解液、Gey's Lysis Buffer。红细胞裂解液(Red Blood Cell LysisBuffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的 组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为 NH4Cl。

  尚宝生物 RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解无核红细胞的同时几乎不损 伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。对于裂解、去除有细胞核红细胞，例如鸟或禽类的红细胞，效 果不佳，裂解类似细胞时，不建议采用。该裂解液经过滤除菌，为10×的浓缩液，使用1×RBC Lysis Buffer 处理 过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测， 尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。

产品组成：

名称 规格 保存条件 RBC Lysis Buffer(10×) 100ml/500ml 4℃

自备材料：

1. 胰蛋白酶

2. 离心机

3. PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液

操作步骤（仅供参考）：

注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释 RBC Lysis Buffer(10×)至 1×使用，流式细胞术除外。

(一)组织细胞样本的常规操作

1. 制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2. 裂解：加入 3～5 倍细胞沉淀体积的 1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解 1～2min。本操作步骤在 4℃ 条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3. 离心: 4℃，400～500g 离心 5min，弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。

4. 如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 各一次。

5. 洗涤：根据实验要求加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，400～500g 离心 2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液 的量一般应大于细胞沉淀体积的 5 倍以上。

6. 如有必要，重复上述步骤 5 一次，共洗涤 1～2 次。

7. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)

1. 制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。

2. 裂解：加入细胞 5 倍细胞沉淀体积的 1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解 1～2min。 本操作步骤在 4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3. 加入 15～20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

4. 离心：4℃，400～500g 离心 5min，弃红色上清，本离心步骤亦可在室温下操作。

5. 如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤 2～4 各一次。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

(三)血液样本的常规操作

1. 取新鲜抗凝血，400～500g 离心 5min，弃上清。

2. 裂解: 加入 6～10 倍细胞沉淀体积的 1×RBC Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解 1～5min。本操作步骤在 4℃ 条件下操作更佳，亦可在室温下操作。(特别提醒：对于鼠的血液，裂解 1～2min 已经足够，对于人的外周 血，宜延长裂解时间至 4～5min，并且裂解过程中轻轻摇动以促进红细胞裂解。)

3. 离心: 4℃，400～500g 离心 5min，弃红色上清。本步骤亦可在室温下操作。

4. 如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。

5. 洗涤: 根据实验要求加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，400～500g 离心 2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液 的量一般应大于细胞沉淀体积的 5 倍以上。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

注意：对于微量或少量的血液样本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液体积的 ACK Lysis Buffer 进 行第 2 步操作，并在 4℃或室温裂解 4～15min。对于鼠的血液，裂解 4～5min 已经足够； 对于人的外周血，宜 延长裂解时间至 10min，但通常不宜超过 15min，并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。

(四)血液样本的快速操作(无需洗涤)

1. 新鲜抗凝血中加入 10 倍体积的 1×RBC Lysis Buffer，轻轻吹打混匀，裂解 4～15min。 本操作步骤在 4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。（特别提醒：对于鼠的血液，裂解 4～5min 已经足 够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至 10min，但通常不宜超过 15min，并且裂解过程中宜适当摇动以促进红 细胞裂解。）

2. 加入 20～30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀。

3. 400～500g 离心 5min，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4. 如果发现红细胞裂解不*，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。

5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

注意事项：

1. 制备细胞悬液时应根据实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。

2. 后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。

3. 离心步骤尽量在 4℃离心机上操作。

4. 常规步骤不快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效 果也更好，不需要大体积的离心管；快速步骤少了一次离心过程，洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离 心管。

5. 离心洗涤后，通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。

6. 如果经过 1×RBC Lysis Buffer 处理后的样品后续用于总 RNA 的提取，在处理细胞时不必使用 DEPC 处理的 溶液，即无需在该操作中特意去除 RNase。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12 个月有效。